国际生殖健康/计划生育杂志
國際生殖健康/計劃生育雜誌
국제생식건강/계화생육잡지
JOURNLA OF INTERNATIONAL REPRODUCTIVE HEALTH/FAMILY PLANNING
2014年
2期
95-98,封3
,共5页
崔玉倩%赵涵%马增香%赵世斗%徐海静%王文婷%郭海鹏%陈子江
崔玉倩%趙涵%馬增香%趙世鬥%徐海靜%王文婷%郭海鵬%陳子江
최옥천%조함%마증향%조세두%서해정%왕문정%곽해붕%진자강
Tox3%慢病毒载体%粒层细胞%小鼠
Tox3%慢病毒載體%粒層細胞%小鼠
Tox3%만병독재체%립층세포%소서
Tox3%Lentiviral vector%Granulosa cells%Mice
目的:构建重组慢病毒载体pCDH-Tox3-Flag,并检测其转染小鼠原代卵泡颗粒细胞后的表达情况.方法:利用DNA重组技术将小鼠Tox3基因克隆入慢病毒表达载体pCDH-MCS-T2A-copGFP-MSCV中,通过酶切、测序验证后,将重组慢病毒载体pCDH-Tox3-Flag、包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染HEK293FT细胞,包装重组慢病毒LV-Tox3-Flag,并感染小鼠原代颗粒细胞,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Tox3 mRNA的转录水平,蛋白质印迹(Western blot)法检测TOX3-Flag蛋白的表达情况.结果:经酶切及测序结果证实,构建了重组慢病毒载体LV-Tox3;RT-PCR及Western blot结果显示慢病毒感染小鼠原代颗粒细胞后,Tox3基因能在细胞内正确转录、翻译并稳定表达TOX3蛋白.结论:成功建立Tox3基因慢病毒表达载体L V-Tox3-Flag,包装的慢病毒能够成功感染小鼠原代颗粒细胞,并使Tox3基因得到稳定表达,为后续研究Tox3基因在生殖相关疾病的生理与病理作用奠定了基础.
目的:構建重組慢病毒載體pCDH-Tox3-Flag,併檢測其轉染小鼠原代卵泡顆粒細胞後的錶達情況.方法:利用DNA重組技術將小鼠Tox3基因剋隆入慢病毒錶達載體pCDH-MCS-T2A-copGFP-MSCV中,通過酶切、測序驗證後,將重組慢病毒載體pCDH-Tox3-Flag、包裝質粒psPAX2和包膜質粒pMD2.G共轉染HEK293FT細胞,包裝重組慢病毒LV-Tox3-Flag,併感染小鼠原代顆粒細胞,用反轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)檢測Tox3 mRNA的轉錄水平,蛋白質印跡(Western blot)法檢測TOX3-Flag蛋白的錶達情況.結果:經酶切及測序結果證實,構建瞭重組慢病毒載體LV-Tox3;RT-PCR及Western blot結果顯示慢病毒感染小鼠原代顆粒細胞後,Tox3基因能在細胞內正確轉錄、翻譯併穩定錶達TOX3蛋白.結論:成功建立Tox3基因慢病毒錶達載體L V-Tox3-Flag,包裝的慢病毒能夠成功感染小鼠原代顆粒細胞,併使Tox3基因得到穩定錶達,為後續研究Tox3基因在生殖相關疾病的生理與病理作用奠定瞭基礎.
목적:구건중조만병독재체pCDH-Tox3-Flag,병검측기전염소서원대란포과립세포후적표체정황.방법:이용DNA중조기술장소서Tox3기인극륭입만병독표체재체pCDH-MCS-T2A-copGFP-MSCV중,통과매절、측서험증후,장중조만병독재체pCDH-Tox3-Flag、포장질립psPAX2화포막질립pMD2.G공전염HEK293FT세포,포장중조만병독LV-Tox3-Flag,병감염소서원대과립세포,용반전록취합매련반응(RT-PCR)검측Tox3 mRNA적전록수평,단백질인적(Western blot)법검측TOX3-Flag단백적표체정황.결과:경매절급측서결과증실,구건료중조만병독재체LV-Tox3;RT-PCR급Western blot결과현시만병독감염소서원대과립세포후,Tox3기인능재세포내정학전록、번역병은정표체TOX3단백.결론:성공건립Tox3기인만병독표체재체L V-Tox3-Flag,포장적만병독능구성공감염소서원대과립세포,병사Tox3기인득도은정표체,위후속연구Tox3기인재생식상관질병적생리여병리작용전정료기출.
