作物学报
作物學報
작물학보
ACTA AGRONOMICA SINICA
2014年
3期
447-456
,共10页
秦海峰%龙宁%吴建国%石春海
秦海峰%龍寧%吳建國%石春海
진해봉%룡저%오건국%석춘해
甜叶菊%富集文库%微卫星%磁珠%遗传多样性
甜葉菊%富集文庫%微衛星%磁珠%遺傳多樣性
첨협국%부집문고%미위성%자주%유전다양성
Stevia rebaudiana%Enrichement library%Microsatellite%Magnetic-beads%Genetic diversity
甜叶菊是我国一种重要特种经济作物,其分子标记相关遗传背景研究甚少.本研究基于生物素与链霉亲和素的强亲和性原理,用链霉亲和素顺磁颗粒捕捉人工合成的标记有生物素的寡核苷酸探针(AG)15,间接筛选出含有甜叶菊基因组微卫星序列的DNA酶切片段,将筛选得到的片段连接到pUC-T载体中,构建甜叶菊微卫星序列的富集文库.挑取354个克隆进行菌落PCR检验,从中筛选出158个阳性克隆进行测序.结果表明,134个(84.81%)克隆中含有微卫星序列,其中完美型85个(63.43%)、非完美型15个(11.19%)、复合型34个(25.38%).根据微卫星序列共设计出71对微卫星引物,其中62对能扩增出稳定的条带.利用24个甜叶菊品系对这62对引物的遗传多样性的分析表明,有16个位点表现出多态性,等位基因数为2~8个,平均每个位点扩增得到4.5个等位基因,多态性信息含量在0.3163~0.7595之间,观测杂合度(Ho)与期望杂合度(He)的范围分别为0.2174~0.9167与0.3555~0.8076.通过聚类分析,将甜叶菊分为大小叶两大类.本研究开发出的微卫星标记可为甜叶菊的分子遗传育种提供有效的遗传标记.
甜葉菊是我國一種重要特種經濟作物,其分子標記相關遺傳揹景研究甚少.本研究基于生物素與鏈黴親和素的彊親和性原理,用鏈黴親和素順磁顆粒捕捉人工閤成的標記有生物素的寡覈苷痠探針(AG)15,間接篩選齣含有甜葉菊基因組微衛星序列的DNA酶切片段,將篩選得到的片段連接到pUC-T載體中,構建甜葉菊微衛星序列的富集文庫.挑取354箇剋隆進行菌落PCR檢驗,從中篩選齣158箇暘性剋隆進行測序.結果錶明,134箇(84.81%)剋隆中含有微衛星序列,其中完美型85箇(63.43%)、非完美型15箇(11.19%)、複閤型34箇(25.38%).根據微衛星序列共設計齣71對微衛星引物,其中62對能擴增齣穩定的條帶.利用24箇甜葉菊品繫對這62對引物的遺傳多樣性的分析錶明,有16箇位點錶現齣多態性,等位基因數為2~8箇,平均每箇位點擴增得到4.5箇等位基因,多態性信息含量在0.3163~0.7595之間,觀測雜閤度(Ho)與期望雜閤度(He)的範圍分彆為0.2174~0.9167與0.3555~0.8076.通過聚類分析,將甜葉菊分為大小葉兩大類.本研究開髮齣的微衛星標記可為甜葉菊的分子遺傳育種提供有效的遺傳標記.
첨협국시아국일충중요특충경제작물,기분자표기상관유전배경연구심소.본연구기우생물소여련매친화소적강친화성원리,용련매친화소순자과립포착인공합성적표기유생물소적과핵감산탐침(AG)15,간접사선출함유첨협국기인조미위성서렬적DNA매절편단,장사선득도적편단련접도pUC-T재체중,구건첨협국미위성서렬적부집문고.도취354개극륭진행균락PCR검험,종중사선출158개양성극륭진행측서.결과표명,134개(84.81%)극륭중함유미위성서렬,기중완미형85개(63.43%)、비완미형15개(11.19%)、복합형34개(25.38%).근거미위성서렬공설계출71대미위성인물,기중62대능확증출은정적조대.이용24개첨협국품계대저62대인물적유전다양성적분석표명,유16개위점표현출다태성,등위기인수위2~8개,평균매개위점확증득도4.5개등위기인,다태성신식함량재0.3163~0.7595지간,관측잡합도(Ho)여기망잡합도(He)적범위분별위0.2174~0.9167여0.3555~0.8076.통과취류분석,장첨협국분위대소협량대류.본연구개발출적미위성표기가위첨협국적분자유전육충제공유효적유전표기.