中国动物检疫
中國動物檢疫
중국동물검역
CHINA ANMAL QUARANTINE
2013年
11期
71-74
,共4页
陈本龙%张立怀%王建华%王乃福
陳本龍%張立懷%王建華%王迺福
진본룡%장립부%왕건화%왕내복
猪瘟病毒%强弱毒鉴别%RT-PCR
豬瘟病毒%彊弱毒鑒彆%RT-PCR
저온병독%강약독감별%RT-PCR
Classical swine fever virus (CSFV)%Differentiation of virulent and avirulent virus strains%Reverse transcription polymerase chain(RT-PCR)
根据Genbank上发表的猪瘟病毒(CSFV)全基因组序列,选择猪瘟强毒株和兔化弱毒疫苗株序列存在的差异区域,分别设计合成两条特异性的上游引物,一条只针对强毒毒株,一条只针对兔化弱毒疫苗株;同时选择高保守区域序列,设计合成了一条强毒和兔化弱毒共用的下游引物,成功建立了一种能够区分猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR检测方法。应用该方法从猪瘟强毒株和兔化弱毒株中扩增出了大小分别为680bp和785bp的特异性片段。该方法对PRRSV、BVDV、PRV、PCV等病毒基因组扩增,结果均为阴性;该方法可以检测出最低为0.5pg的猪瘟病毒RNA,具有高度的特异性和敏感性。本方法的建立为猪瘟的实验室检测和流行病学调查奠定了坚实的基础。
根據Genbank上髮錶的豬瘟病毒(CSFV)全基因組序列,選擇豬瘟彊毒株和兔化弱毒疫苗株序列存在的差異區域,分彆設計閤成兩條特異性的上遊引物,一條隻針對彊毒毒株,一條隻針對兔化弱毒疫苗株;同時選擇高保守區域序列,設計閤成瞭一條彊毒和兔化弱毒共用的下遊引物,成功建立瞭一種能夠區分豬瘟病毒彊毒株和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR檢測方法。應用該方法從豬瘟彊毒株和兔化弱毒株中擴增齣瞭大小分彆為680bp和785bp的特異性片段。該方法對PRRSV、BVDV、PRV、PCV等病毒基因組擴增,結果均為陰性;該方法可以檢測齣最低為0.5pg的豬瘟病毒RNA,具有高度的特異性和敏感性。本方法的建立為豬瘟的實驗室檢測和流行病學調查奠定瞭堅實的基礎。
근거Genbank상발표적저온병독(CSFV)전기인조서렬,선택저온강독주화토화약독역묘주서렬존재적차이구역,분별설계합성량조특이성적상유인물,일조지침대강독독주,일조지침대토화약독역묘주;동시선택고보수구역서렬,설계합성료일조강독화토화약독공용적하유인물,성공건립료일충능구구분저온병독강독주화토화약독역묘주적RT-PCR검측방법。응용해방법종저온강독주화토화약독주중확증출료대소분별위680bp화785bp적특이성편단。해방법대PRRSV、BVDV、PRV、PCV등병독기인조확증,결과균위음성;해방법가이검측출최저위0.5pg적저온병독RNA,구유고도적특이성화민감성。본방법적건립위저온적실험실검측화류행병학조사전정료견실적기출。
A reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) was developed for the differentiation of wild-type classical swine fever virus from the C-strain vaccine with primers specific respectively for CSFV C-strain vaccine and highly virulent Shimen strain as the forward primer and a common downstream primer designed according to the highly conserved regions of CSFV genome in GenBank. By this method, a fragment of 785bp was amplified from genomic RNA of C-strain and a fragment of 680bp was amplified from genomic RNA of Shimen strain. No amplification was achieved for genomic RNAs of PRRSV、BVDV、PRV、PCV etc. The method could detect 0.5pg of CSFV RNA. The study laid the foundation for the establishment of the laboratory tests and epidemiological investigation of CSFV.