生物技术进展
生物技術進展
생물기술진전
2014年
2期
107-112,封3
,共7页
口蹄疫病毒%开放阅读框%腺病毒载体
口蹄疫病毒%開放閱讀框%腺病毒載體
구제역병독%개방열독광%선병독재체
为研制O型口蹄疫病毒(FMDV)复制缺陷型腺病毒活载体疫苗毒株,通过RT-PCR方法获得了O型FMDV的开放阅读框(ORF)基因,并定向克隆到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建了重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-ORF,经PCR、酶切及测序鉴定,克隆得到的ORF编码基因序列与原始强毒株O型FMDV的ORF编码基因相似性达99.8％.将含有目的基因的穿梭质粒线性化后和腺病毒骨架载体pAdeasy-2共同电转化入大肠杆菌BJ5183感受态细胞中,得到重组腺病毒质粒pAd-ORF,经PCR和酶切鉴定正确.本研究成功获得了含有现代O型疫苗用FMDV毒株的全ORF编码基因的阳性克隆,并成功构建了含有完整编码基因表达盒的重组腺病毒穿梭质粒及其腺病毒骨架质粒.
為研製O型口蹄疫病毒(FMDV)複製缺陷型腺病毒活載體疫苗毒株,通過RT-PCR方法穫得瞭O型FMDV的開放閱讀框(ORF)基因,併定嚮剋隆到腺病毒穿梭載體pAdTrack-CMV中,構建瞭重組腺病毒穿梭質粒pAdTrack-CMV-ORF,經PCR、酶切及測序鑒定,剋隆得到的ORF編碼基因序列與原始彊毒株O型FMDV的ORF編碼基因相似性達99.8％.將含有目的基因的穿梭質粒線性化後和腺病毒骨架載體pAdeasy-2共同電轉化入大腸桿菌BJ5183感受態細胞中,得到重組腺病毒質粒pAd-ORF,經PCR和酶切鑒定正確.本研究成功穫得瞭含有現代O型疫苗用FMDV毒株的全ORF編碼基因的暘性剋隆,併成功構建瞭含有完整編碼基因錶達盒的重組腺病毒穿梭質粒及其腺病毒骨架質粒.
위연제O형구제역병독(FMDV)복제결함형선병독활재체역묘독주,통과RT-PCR방법획득료O형FMDV적개방열독광(ORF)기인,병정향극륭도선병독천사재체pAdTrack-CMV중,구건료중조선병독천사질립pAdTrack-CMV-ORF,경PCR、매절급측서감정,극륭득도적ORF편마기인서렬여원시강독주O형FMDV적ORF편마기인상사성체99.8％.장함유목적기인적천사질립선성화후화선병독골가재체pAdeasy-2공동전전화입대장간균BJ5183감수태세포중,득도중조선병독질립pAd-ORF,경PCR화매절감정정학.본연구성공획득료함유현대O형역묘용FMDV독주적전ORF편마기인적양성극륭,병성공구건료함유완정편마기인표체합적중조선병독천사질립급기선병독골가질립.
