CAJ | 학술논문

在日粮蛋白质的降解过程中,蛋白酶是把蛋白质水解为肽或氨基酸的关键酶,由于受到纯培养技术的影响,瘤胃内产生蛋白酶活性的细菌和各种蛋白酶的遗传信息知之甚少.本实验旨在利用蛋白酶选择性培养基从瘤胃微生物Fosmid文库中筛选出含蛋白酶活性的克隆子,通过生物信息学分析获得这些克隆子的遗传信息.应用脱脂乳粉和大豆蛋白粉两种蛋白酶选择性培养基,从30 000个克隆中筛选得到14个具有蛋白酶活性的活性克隆.利用福林酚试剂法检测14个蛋白酶克隆子的酶活力,结果表明,每个克隆子分别具有不同的蛋白质分解能力.以酪蛋白为底物的克隆子酶活力介于0.59～2.74 U/mg之间,以大豆蛋白粉为底物的克隆子酶活力在0.70～7.19 U/mg之间,而且同一克隆对于不同的底物所表现的酶活力也不同.随机挑选10个活性克隆进行末端测序(GenBank登录号:JY084410～JY084429),经Blast比对后发现,45％的基因序列与已知编码基因无法匹配,pro 10F末端序列与金属肽酶匹配度为54％,属于肽酶M13家族,且该克隆蛋白酶最适pH值为7.0,为下一步研究该克隆的酶学性质和序列特征分析提供了基础资料.
재일량단백질적강해과정중,단백매시파단백질수해위태혹안기산적관건매,유우수도순배양기술적영향,류위내산생단백매활성적세균화각충단백매적유전신식지지심소.본실험지재이용단백매선택성배양기종류위미생물Fosmid문고중사선출함단백매활성적극륭자,통과생물신식학분석획득저사극륭자적유전신식.응용탈지유분화대두단백분량충단백매선택성배양기,종30 000개극륭중사선득도14개구유단백매활성적활성극륭.이용복림분시제법검측14개단백매극륭자적매활력,결과표명,매개극륭자분별구유불동적단백질분해능력.이락단백위저물적극륭자매활력개우0.59～2.74 U/mg지간,이대두단백분위저물적극륭자매활력재0.70～7.19 U/mg지간,이차동일극륭대우불동적저물소표현적매활력야불동.수궤도선10개활성극륭진행말단측서(GenBank등록호:JY084410～JY084429),경Blast비대후발현,45％적기인서렬여이지편마기인무법필배,pro 10F말단서렬여금속태매필배도위54％,속우태매M13가족,차해극륭단백매최괄pH치위7.0,위하일보연구해극륭적매학성질화서렬특정분석제공료기출자료.