畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
8期
8-12
,共5页
马怡隽%王晴%刘家宽%韩鑫%范红结
馬怡雋%王晴%劉傢寬%韓鑫%範紅結
마이준%왕청%류가관%한흠%범홍결
马链球菌兽疫亚种%酮基转移酶%原核表达%免疫保护
馬鏈毬菌獸疫亞種%酮基轉移酶%原覈錶達%免疫保護
마련구균수역아충%동기전이매%원핵표체%면역보호
根据已发表的马链球菌兽疫亚种MGCS10565酮基转移酶(transketolase)的基因序列,设计并合成引物.以ATCC35246株基因组DNA为模板,通过PCR技术,扩增出目的基因并定向克隆至表达载体pET-28a(+)中,然后将重组质粒转化人大肠杆菌BL21( DE3)中,分析并纯化表达产物.选用ICR小鼠作为实验动物模型,以纯化的重组融合蛋白通过皮下注射途径免疫小鼠,并用间接ELISA法监测小鼠血清中的抗体效价.结果表明重组蛋白免疫小鼠后能产生有效的免疫应答,血清中抗体水平有明显的升高.加强免疫2周后,以5 LD5o的ATCC35246强毒株攻击免疫组及对照组,结果免疫组小鼠的保护率可达37.5％.表明原核表达产物免疫ICR小鼠,可使其对同源菌株攻击产生一定的保护作用,在亚单位疫苗研制中具有潜在的应用价值.
根據已髮錶的馬鏈毬菌獸疫亞種MGCS10565酮基轉移酶(transketolase)的基因序列,設計併閤成引物.以ATCC35246株基因組DNA為模闆,通過PCR技術,擴增齣目的基因併定嚮剋隆至錶達載體pET-28a(+)中,然後將重組質粒轉化人大腸桿菌BL21( DE3)中,分析併純化錶達產物.選用ICR小鼠作為實驗動物模型,以純化的重組融閤蛋白通過皮下註射途徑免疫小鼠,併用間接ELISA法鑑測小鼠血清中的抗體效價.結果錶明重組蛋白免疫小鼠後能產生有效的免疫應答,血清中抗體水平有明顯的升高.加彊免疫2週後,以5 LD5o的ATCC35246彊毒株攻擊免疫組及對照組,結果免疫組小鼠的保護率可達37.5％.錶明原覈錶達產物免疫ICR小鼠,可使其對同源菌株攻擊產生一定的保護作用,在亞單位疫苗研製中具有潛在的應用價值.
근거이발표적마련구균수역아충MGCS10565동기전이매(transketolase)적기인서렬,설계병합성인물.이ATCC35246주기인조DNA위모판,통과PCR기술,확증출목적기인병정향극륭지표체재체pET-28a(+)중,연후장중조질립전화인대장간균BL21( DE3)중,분석병순화표체산물.선용ICR소서작위실험동물모형,이순화적중조융합단백통과피하주사도경면역소서,병용간접ELISA법감측소서혈청중적항체효개.결과표명중조단백면역소서후능산생유효적면역응답,혈청중항체수평유명현적승고.가강면역2주후,이5 LD5o적ATCC35246강독주공격면역조급대조조,결과면역조소서적보호솔가체37.5％.표명원핵표체산물면역ICR소서,가사기대동원균주공격산생일정적보호작용,재아단위역묘연제중구유잠재적응용개치.
