西北农业学报
西北農業學報
서북농업학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-OCCIDENTALIS SINICA
2012年
3期
46-50
,共5页
雷洁%王瑞%张优优%张智英
雷潔%王瑞%張優優%張智英
뢰길%왕서%장우우%장지영
基因敲除%酿酒酵母%ERG6基因%Cre/lox P 重组系统
基因敲除%釀酒酵母%ERG6基因%Cre/lox P 重組繫統
기인고제%양주효모%ERG6기인%Cre/lox P 중조계통
设计含有与ERG6基因两侧序列同源的长引物,以质粒pBlue-Kan为模板进行PCR扩增,构建含有Cre/lox P系统的酿酒酵母ERG6基因敲除组件.将基因敲除组件转化至酿酒酵母(Saccharomyce cerevisiae)AD1-8,通过同源重组的方式使目的基因缺失,获得为lox P-Kan-lox P序列组件所替换而产生Kanr的阳性克隆子.然后再将质粒pHis-Cre转入阳性克隆子表达Cre重组酶敲除筛选标记,成功获得酿酒酵母ERG6基因缺失的突变株,并命名为AD1-8-δ.
設計含有與ERG6基因兩側序列同源的長引物,以質粒pBlue-Kan為模闆進行PCR擴增,構建含有Cre/lox P繫統的釀酒酵母ERG6基因敲除組件.將基因敲除組件轉化至釀酒酵母(Saccharomyce cerevisiae)AD1-8,通過同源重組的方式使目的基因缺失,穫得為lox P-Kan-lox P序列組件所替換而產生Kanr的暘性剋隆子.然後再將質粒pHis-Cre轉入暘性剋隆子錶達Cre重組酶敲除篩選標記,成功穫得釀酒酵母ERG6基因缺失的突變株,併命名為AD1-8-δ.
설계함유여ERG6기인량측서렬동원적장인물,이질립pBlue-Kan위모판진행PCR확증,구건함유Cre/lox P계통적양주효모ERG6기인고제조건.장기인고제조건전화지양주효모(Saccharomyce cerevisiae)AD1-8,통과동원중조적방식사목적기인결실,획득위lox P-Kan-lox P서렬조건소체환이산생Kanr적양성극륭자.연후재장질립pHis-Cre전입양성극륭자표체Cre중조매고제사선표기,성공획득양주효모ERG6기인결실적돌변주,병명명위AD1-8-δ.
