西北农业学报
西北農業學報
서북농업학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-OCCIDENTALIS SINICA
2012年
3期
7-11
,共5页
张兴晓%邹金峰%相琪旺%王鑫%陈琳%谢之景%姜世金
張興曉%鄒金峰%相琪旺%王鑫%陳琳%謝之景%薑世金
장흥효%추금봉%상기왕%왕흠%진림%사지경%강세금
鸭圆环病毒%Cap基因%昆虫细胞-杆状病毒表达系统%IFA
鴨圓環病毒%Cap基因%昆蟲細胞-桿狀病毒錶達繫統%IFA
압원배병독%Cap기인%곤충세포-간상병독표체계통%IFA
通过PCR方法扩增完整的鸭圆环病毒Cap基因,按正确的阅读框架将其克隆入pFastBacTM HTB杆状病毒载体,将筛选的阳性重组载体pF-CP转化至含有杆状病毒穿梭载体和辅助载体的DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,经过蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBacmid-CP.在脂质体的介导下转染Sf9昆虫细胞,72 h后获得重组杆状病毒.Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验结果表明,表达的蛋白与原核表达Cap蛋白免疫小鼠采集的血清具有良好的反应原性,为进一步研究Cap蛋白的功能奠定基础.
通過PCR方法擴增完整的鴨圓環病毒Cap基因,按正確的閱讀框架將其剋隆入pFastBacTM HTB桿狀病毒載體,將篩選的暘性重組載體pF-CP轉化至含有桿狀病毒穿梭載體和輔助載體的DH10Bac大腸桿菌感受態細胞,經過藍白斑篩選和PCR鑒定,穫得重組錶達載體rBacmid-CP.在脂質體的介導下轉染Sf9昆蟲細胞,72 h後穫得重組桿狀病毒.Western blot和間接免疫熒光(IFA)試驗結果錶明,錶達的蛋白與原覈錶達Cap蛋白免疫小鼠採集的血清具有良好的反應原性,為進一步研究Cap蛋白的功能奠定基礎.
통과PCR방법확증완정적압원배병독Cap기인,안정학적열독광가장기극륭입pFastBacTM HTB간상병독재체,장사선적양성중조재체pF-CP전화지함유간상병독천사재체화보조재체적DH10Bac대장간균감수태세포,경과람백반사선화PCR감정,획득중조표체재체rBacmid-CP.재지질체적개도하전염Sf9곤충세포,72 h후획득중조간상병독.Western blot화간접면역형광(IFA)시험결과표명,표체적단백여원핵표체Cap단백면역소서채집적혈청구유량호적반응원성,위진일보연구Cap단백적공능전정기출.
