CAJ | 학술논문

目的:观察放线菌素D (actinomycin D,ACTD)处理V79靶细胞获得的条件培养液(conditioned medium,CM)对V79旁观者细胞p53 mRNA和蛋白表达及细胞周期的影响,以研究ACTD诱导旁观者效应发生的可能机制.方法:4.0 mg/L ACTD处理V79靶细胞1h,PBS洗3次,加入新鲜培养液后开始计时,分别在第4、8、12和24h获取靶细胞不同时段的CM.用不同时段CM培养正常V79细胞24h后,分别采用RT-PCR检测旁观者细胞中p53的mRNA水平；免疫组化法检测p53蛋白的表达；流式细胞术测定旁观者细胞的细胞周期分布.结果:与对照组比较,p53 mRNA水平在4、8和24 h CM处理组均增加(P＜0.01),在4～12 h CM时段,p53mRNA水平随着时段的延后呈逐渐降低趋势,12h组降至最低,与阴性对照的水平接近(P＞0.05).各CM处理组p53蛋白平均灰度值和移分光密度,除12 h CM组外均较对照组显著增加(P＜0.05).随着时段的延后(4～12 h),p53蛋白表达逐渐减少,12h组降至最低,与阴性对照间的差异无统计学意义(P＞0.05),p53蛋白表达与p53 mRNA表达结果一致.不同时段CM处理组旁观者细胞G0/G1期比阴性对照组增多(P＜0.05),4hCM组增加最明显；各CM处理组S期细胞均较阴性对照组减少(P＜0.01),但组间差异无统计学意义(P＞0.05)；而G2/M期细胞在4hCM组下降明显,与阴性对照间的差异有统计学意义(P＜0.01); 8～12 h逐渐增加,12h组接近对照水平(P＞0.05); 24h又下降,与阴性对照间的差异有统计学意义(P＜0.01).结论:ACTD诱导旁观者效应可能是通过靶细胞的CM影响旁观者细胞p53 mRNA和蛋白的表达,并影响细胞周期的进展而引起的,以4hCM诱导的效应最强.
목적:관찰방선균소D (actinomycin D,ACTD)처리V79파세포획득적조건배양액(conditioned medium,CM)대V79방관자세포p53 mRNA화단백표체급세포주기적영향,이연구ACTD유도방관자효응발생적가능궤제.방법:4.0 mg/L ACTD처리V79파세포1h,PBS세3차,가입신선배양액후개시계시,분별재제4、8、12화24h획취파세포불동시단적CM.용불동시단CM배양정상V79세포24h후,분별채용RT-PCR검측방관자세포중p53적mRNA수평；면역조화법검측p53단백적표체；류식세포술측정방관자세포적세포주기분포.결과:여대조조비교,p53 mRNA수평재4、8화24 h CM처리조균증가(P＜0.01),재4～12 h CM시단,p53mRNA수평수착시단적연후정축점강저추세,12h조강지최저,여음성대조적수평접근(P＞0.05).각CM처리조p53단백평균회도치화이분광밀도,제12 h CM조외균교대조조현저증가(P＜0.05).수착시단적연후(4～12 h),p53단백표체축점감소,12h조강지최저,여음성대조간적차이무통계학의의(P＞0.05),p53단백표체여p53 mRNA표체결과일치.불동시단CM처리조방관자세포G0/G1기비음성대조조증다(P＜0.05),4hCM조증가최명현；각CM처리조S기세포균교음성대조조감소(P＜0.01),단조간차이무통계학의의(P＞0.05)；이G2/M기세포재4hCM조하강명현,여음성대조간적차이유통계학의의(P＜0.01); 8～12 h축점증가,12h조접근대조수평(P＞0.05); 24h우하강,여음성대조간적차이유통계학의의(P＜0.01).결론:ACTD유도방관자효응가능시통과파세포적CM영향방관자세포p53 mRNA화단백적표체,병영향세포주기적진전이인기적,이4hCM유도적효응최강.