山东大学学报（理学版）
山東大學學報（理學版）
산동대학학보（이학판）
JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2014年
7期
12-17,22
,共7页
东亚三角涡虫%DjRock2%RNAi%RT-PCR%再生
東亞三角渦蟲%DjRock2%RNAi%RT-PCR%再生
동아삼각와충%DjRock2%RNAi%RT-PCR%재생
Dugesia japonica%DjRock2%RNAi%RT-PCR%regeneration
利用体外转录的方法合成DjRock2基因的RNA探针，检测RNA探针效率后，对成体及再生过程中的涡虫进行原位杂交试验；将DjRock2基因插入到L4440载体中，构建L4440-DjRock2干扰载体，合成dsRNA并微注射涡虫，利用RT-PCR和Western blot技术检测干扰后再生过程中DjRock2 mRNA和蛋白表达的下调作用。结果表明：DjRock2基因在成熟涡虫中枢神经系统中特异性表达，再生过程中伤口处胚基位置有阳性信号；干扰成体涡虫在再生第3天，头部、中部、尾部都有胚基的形成，但是第5天开始伤口处细胞凋亡，成体干细胞没有完成正常的分化，头部、中部、尾部再生都受到抑制，不能正常完成再生，甚至死亡。 RT-PCR技术检测到RNA干扰后DjRock2 mRNA的表达显著下降。 Western blot检测到干扰后DjRock2蛋白的表达下调。所构建的L4440-DjRock2干扰载体干扰效率高，表型变化明显，从基因和蛋白方面进行分析，为进一步研究Rock2基因的功能奠定了基础。
利用體外轉錄的方法閤成DjRock2基因的RNA探針，檢測RNA探針效率後，對成體及再生過程中的渦蟲進行原位雜交試驗；將DjRock2基因插入到L4440載體中，構建L4440-DjRock2榦擾載體，閤成dsRNA併微註射渦蟲，利用RT-PCR和Western blot技術檢測榦擾後再生過程中DjRock2 mRNA和蛋白錶達的下調作用。結果錶明：DjRock2基因在成熟渦蟲中樞神經繫統中特異性錶達，再生過程中傷口處胚基位置有暘性信號；榦擾成體渦蟲在再生第3天，頭部、中部、尾部都有胚基的形成，但是第5天開始傷口處細胞凋亡，成體榦細胞沒有完成正常的分化，頭部、中部、尾部再生都受到抑製，不能正常完成再生，甚至死亡。 RT-PCR技術檢測到RNA榦擾後DjRock2 mRNA的錶達顯著下降。 Western blot檢測到榦擾後DjRock2蛋白的錶達下調。所構建的L4440-DjRock2榦擾載體榦擾效率高，錶型變化明顯，從基因和蛋白方麵進行分析，為進一步研究Rock2基因的功能奠定瞭基礎。
이용체외전록적방법합성DjRock2기인적RNA탐침，검측RNA탐침효솔후，대성체급재생과정중적와충진행원위잡교시험；장DjRock2기인삽입도L4440재체중，구건L4440-DjRock2간우재체，합성dsRNA병미주사와충，이용RT-PCR화Western blot기술검측간우후재생과정중DjRock2 mRNA화단백표체적하조작용。결과표명：DjRock2기인재성숙와충중추신경계통중특이성표체，재생과정중상구처배기위치유양성신호；간우성체와충재재생제3천，두부、중부、미부도유배기적형성，단시제5천개시상구처세포조망，성체간세포몰유완성정상적분화，두부、중부、미부재생도수도억제，불능정상완성재생，심지사망。 RT-PCR기술검측도RNA간우후DjRock2 mRNA적표체현저하강。 Western blot검측도간우후DjRock2단백적표체하조。소구건적L4440-DjRock2간우재체간우효솔고，표형변화명현，종기인화단백방면진행분석，위진일보연구Rock2기인적공능전정료기출。
In vitro transcription of RNA synthesized DjRock2 gene probe, the detection efficiency of RNA probe, and regeneration of adult planarians in situ hybridization.Then insert DjRock2 gene to the vector L4440, construct L4440-DjRock2 interference vector, synthetic dsRNA and microinjection planarian, using RT-PCR and Western blot technique to detect interference regeneration process expressing down effect on DjRock2 mRNA and protein.The results showed that:DjRock2 genes specifically expressed in mature planarian central nervous system regeneration blastema wound posi-tion has a positive signal;interfere adult planarian regeneration of the first three days at the head, middle and tail of the embryo group has, but the first five days at the beginning of the wound apoptosis, adult stem cells do not complete the normal differentiation of the head , middle and tail regeneration is inhibited, not the normal completion of regeneration, and even death.RT-PCR technique significantly decreased DjRock2 mRNA expression was detected after RNA interfer-ence.Upon detection of interference Western blot protein expression DjRock2 down.Constructed L4440-DjRock2 high interference carrier interference efficiency, phenotypic changes significantly, the analysis of gene and protein, laid the foundation for further research Rock2 gene function.
