CAJ | 학술논문

为了研究和探索磺胺氯吡嗪抗弓形虫的作用机理,构建磺胺氯吡嗪处理弓形虫的抑制性消减文库.将刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株速殖子腹腔注射(10000个/只鼠)感染昆明系小鼠,大量收集并纯化速殖子.用250 mg/mL磺胺氯吡嗪PBS溶液和PBS分别浸泡速殖子,37℃恒温箱孵育2h,分别提取虫体的总RNA和mRNA,以PBS处理的正常虫体cDNA为驱动组,以药物处理虫体cDNA为实验组,构建药物处理前后弓形虫速殖子的抑制性消减文库,对部分阳性克隆进行测序和序列分析.结果显示,提取的虫体总RNA纯度高,合成的双链cDNA经RsaⅠ酶切反应较完全；从消减文库中随机选择100个阳性克隆进行PCR扩增,其插入片段长度在200～750 bp之间,文库的重组率达93％以上；随机挑取30个阳性克隆进行测序,获得11个单一序列,Blast分析显示有7个单一有效EST序列与已知蛋白质相似性较高.结果表明,已成功构建磺胺氯吡嗪处理弓形虫速殖子的抑制性消减cDNA文库,并对部分阳性克隆进行了初步分析,为深入研究磺胺氯吡嗪的抗弓形虫机制和寻找药物作用的关键靶分子奠定了基础.
위료연구화탐색광알록필진항궁형충적작용궤리,구건광알록필진처리궁형충적억제성소감문고.장강지궁형충(Toxoplasma gondii)RH주속식자복강주사(10000개/지서)감염곤명계소서,대량수집병순화속식자.용250 mg/mL광알록필진PBS용액화PBS분별침포속식자,37℃항온상부육2h,분별제취충체적총RNA화mRNA,이PBS처리적정상충체cDNA위구동조,이약물처리충체cDNA위실험조,구건약물처리전후궁형충속식자적억제성소감문고,대부분양성극륭진행측서화서렬분석.결과현시,제취적충체총RNA순도고,합성적쌍련cDNA경RsaⅠ매절반응교완전；종소감문고중수궤선택100개양성극륭진행PCR확증,기삽입편단장도재200～750 bp지간,문고적중조솔체93％이상；수궤도취30개양성극륭진행측서,획득11개단일서렬,Blast분석현시유7개단일유효EST서렬여이지단백질상사성교고.결과표명,이성공구건광알록필진처리궁형충속식자적억제성소감cDNA문고,병대부분양성극륭진행료초보분석,위심입연구광알록필진적항궁형충궤제화심조약물작용적관건파분자전정료기출.