中华细胞与干细胞杂志（电子版）
中華細胞與榦細胞雜誌（電子版）
중화세포여간세포잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF CELL AND STEM CELL
2013年
3期
6-11
,共6页
林凤锦%王水良%黄粱浒%王瑾%祝玲%王庆华%谭建明
林鳳錦%王水良%黃粱滸%王瑾%祝玲%王慶華%譚建明
림봉금%왕수량%황량호%왕근%축령%왕경화%담건명
慢病毒%脐带间充质干细胞%绿色荧光蛋白%荧光素酶%外源基因共表达
慢病毒%臍帶間充質榦細胞%綠色熒光蛋白%熒光素酶%外源基因共錶達
만병독%제대간충질간세포%록색형광단백%형광소매%외원기인공표체
Lentivirus%Umbilical cord mesenchymal stem cells (UC-MSCs)%Green fluorescent protein (GFP)%Luciferase%Co-expression of exogenous genes
目的 建立慢病毒载体系统介导的人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)绿色荧光蛋白(GFP)和荧光素酶共表达技术体系.方法 GFP和荧光素酶共表达慢病毒载体与相应包装质粒psPAX2和pMD2.G经聚乙烯亚胺介导共转染HEK293T细胞以包装病毒;病毒感染P4代hUC-MSC 12 h后,再行嘌呤霉素筛选24 h,普通光学显微镜观察细胞形态,荧光显微镜下观察GFP的表达情况,IVIS Kinetic成像系统拍照以观察和记录慢病毒感染后hUC-MSC荧光素酶的表达情况;MTS法行细胞生长曲线作图,同时,普通和实时定量RT-PCR法检测细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E1和p21WAF 1/CIP1的表达.采用方差分析和t检验进行统计学分析.结果 慢病毒感染并不会造成体外培养hUC-MSC形态的明显改变,而荧光显微镜和IVIS Kinetic成像系统的观察结果则分别证实,GFP和荧光素酶经慢病毒载体系统的介导可在hUC-MSC中成功地共表达.此外,细胞生长曲线作图结果表明,对照和GFP及荧光素酶共表达慢病毒感染后hUC-MSC的生长增殖速率相仿(P＞ 0.01);实时定量RT-PCR法检测结果则显示,与对照慢病毒感染相比,GFP和荧光素酶共表达慢病毒感染后其细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E1和p21WAF1/C1P1 mRNA表达水平分别是对照组的1.11倍(P=0.130)、0.54倍(P=0.000)和0.78倍(P=0.005),表明外源GFP和荧光素酶共表达对体外培养的hUC-MSC生长增殖等表型无显著影响.结论慢病毒载体系统可有效介导外源基因在hUC-MSC中的表达;同时,GFP和荧光素酶在hUC-MSC中的共表达也将极大地方便其体内转归的示踪.
目的 建立慢病毒載體繫統介導的人臍帶間充質榦細胞(hUC-MSC)綠色熒光蛋白(GFP)和熒光素酶共錶達技術體繫.方法 GFP和熒光素酶共錶達慢病毒載體與相應包裝質粒psPAX2和pMD2.G經聚乙烯亞胺介導共轉染HEK293T細胞以包裝病毒;病毒感染P4代hUC-MSC 12 h後,再行嘌呤黴素篩選24 h,普通光學顯微鏡觀察細胞形態,熒光顯微鏡下觀察GFP的錶達情況,IVIS Kinetic成像繫統拍照以觀察和記錄慢病毒感染後hUC-MSC熒光素酶的錶達情況;MTS法行細胞生長麯線作圖,同時,普通和實時定量RT-PCR法檢測細胞週期調控相關蛋白Cyclin D1、Cyclin E1和p21WAF 1/CIP1的錶達.採用方差分析和t檢驗進行統計學分析.結果 慢病毒感染併不會造成體外培養hUC-MSC形態的明顯改變,而熒光顯微鏡和IVIS Kinetic成像繫統的觀察結果則分彆證實,GFP和熒光素酶經慢病毒載體繫統的介導可在hUC-MSC中成功地共錶達.此外,細胞生長麯線作圖結果錶明,對照和GFP及熒光素酶共錶達慢病毒感染後hUC-MSC的生長增殖速率相倣(P＞ 0.01);實時定量RT-PCR法檢測結果則顯示,與對照慢病毒感染相比,GFP和熒光素酶共錶達慢病毒感染後其細胞週期調控相關蛋白Cyclin D1、Cyclin E1和p21WAF1/C1P1 mRNA錶達水平分彆是對照組的1.11倍(P=0.130)、0.54倍(P=0.000)和0.78倍(P=0.005),錶明外源GFP和熒光素酶共錶達對體外培養的hUC-MSC生長增殖等錶型無顯著影響.結論慢病毒載體繫統可有效介導外源基因在hUC-MSC中的錶達;同時,GFP和熒光素酶在hUC-MSC中的共錶達也將極大地方便其體內轉歸的示蹤.
목적 건립만병독재체계통개도적인제대간충질간세포(hUC-MSC)록색형광단백(GFP)화형광소매공표체기술체계.방법 GFP화형광소매공표체만병독재체여상응포장질립psPAX2화pMD2.G경취을희아알개도공전염HEK293T세포이포장병독;병독감염P4대hUC-MSC 12 h후,재행표령매소사선24 h,보통광학현미경관찰세포형태,형광현미경하관찰GFP적표체정황,IVIS Kinetic성상계통박조이관찰화기록만병독감염후hUC-MSC형광소매적표체정황;MTS법행세포생장곡선작도,동시,보통화실시정량RT-PCR법검측세포주기조공상관단백Cyclin D1、Cyclin E1화p21WAF 1/CIP1적표체.채용방차분석화t검험진행통계학분석.결과 만병독감염병불회조성체외배양hUC-MSC형태적명현개변,이형광현미경화IVIS Kinetic성상계통적관찰결과칙분별증실,GFP화형광소매경만병독재체계통적개도가재hUC-MSC중성공지공표체.차외,세포생장곡선작도결과표명,대조화GFP급형광소매공표체만병독감염후hUC-MSC적생장증식속솔상방(P＞ 0.01);실시정량RT-PCR법검측결과칙현시,여대조만병독감염상비,GFP화형광소매공표체만병독감염후기세포주기조공상관단백Cyclin D1、Cyclin E1화p21WAF1/C1P1 mRNA표체수평분별시대조조적1.11배(P=0.130)、0.54배(P=0.000)화0.78배(P=0.005),표명외원GFP화형광소매공표체대체외배양적hUC-MSC생장증식등표형무현저영향.결론만병독재체계통가유효개도외원기인재hUC-MSC중적표체;동시,GFP화형광소매재hUC-MSC중적공표체야장겁대지방편기체내전귀적시종.
