中国畜牧杂志
中國畜牧雜誌
중국축목잡지
CHINESE JOURNAL OF ANIMAL SCIENCE
2013年
15期
7-12
,共6页
万小颖%李挺%王文洲%施丽娟%李碧春%吴信生
萬小穎%李挺%王文洲%施麗娟%李碧春%吳信生
만소영%리정%왕문주%시려연%리벽춘%오신생
白介素10基因%绿色荧光蛋白%NIH-3T3细胞%亚细胞定位%细胞外及细胞膜%兔
白介素10基因%綠色熒光蛋白%NIH-3T3細胞%亞細胞定位%細胞外及細胞膜%兔
백개소10기인%록색형광단백%NIH-3T3세포%아세포정위%세포외급세포막%토
Interleukin 10 (IL-10) gene%GFP%NIH-3T3 cells%Sub-cellular localization%cell membrane and outside%rabbit
本研究旨在克隆新西兰白兔白细胞介素10(IL-10)基因的cDNA,并探讨其生物信息学功能,进一步通过增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白实现该基因亚细胞水平的表达定位.实验采用RT-PCR方法克隆兔IL-10基因的cDNA,初步进行生物信息学分析,构建含有EGFP报告基因的融合表达载体pEGFP-IL-10.脂质体(LTX)介导基因转染NIH-3T3细胞,48 h后在荧光倒置显微镜下观察基因表达产物的分布,RT-PCR检测mRNA在体外水平的表达.结果表明:实验成功克隆出兔IL-10基因537 bp长的完整编码区(CDS),共编码178个氨基酸,GenBank登录号为NM_001082045;IL-10蛋白的分子量为20.15 ku,理论等电点为8.20;信号肽区域预测结果显示,IL-10蛋白含有一小段信号肽序列,属于分泌型蛋白,并且信号肽酶的切割位置在第21和第22个氨基酸之间;荧光倒置显微镜观察结果发现,融合蛋白在细胞质中表达,而转染pEGFP-C1后荧光蛋白均匀分布于整个细胞;RT-PCR检测mRNA表达明显.结果显示,融合表达载体pEGFP-IL-10构建成功,并在细胞中明显表达,为进一步研究IL-10的生物学功能奠定基础.
本研究旨在剋隆新西蘭白兔白細胞介素10(IL-10)基因的cDNA,併探討其生物信息學功能,進一步通過增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)融閤蛋白實現該基因亞細胞水平的錶達定位.實驗採用RT-PCR方法剋隆兔IL-10基因的cDNA,初步進行生物信息學分析,構建含有EGFP報告基因的融閤錶達載體pEGFP-IL-10.脂質體(LTX)介導基因轉染NIH-3T3細胞,48 h後在熒光倒置顯微鏡下觀察基因錶達產物的分佈,RT-PCR檢測mRNA在體外水平的錶達.結果錶明:實驗成功剋隆齣兔IL-10基因537 bp長的完整編碼區(CDS),共編碼178箇氨基痠,GenBank登錄號為NM_001082045;IL-10蛋白的分子量為20.15 ku,理論等電點為8.20;信號肽區域預測結果顯示,IL-10蛋白含有一小段信號肽序列,屬于分泌型蛋白,併且信號肽酶的切割位置在第21和第22箇氨基痠之間;熒光倒置顯微鏡觀察結果髮現,融閤蛋白在細胞質中錶達,而轉染pEGFP-C1後熒光蛋白均勻分佈于整箇細胞;RT-PCR檢測mRNA錶達明顯.結果顯示,融閤錶達載體pEGFP-IL-10構建成功,併在細胞中明顯錶達,為進一步研究IL-10的生物學功能奠定基礎.
본연구지재극륭신서란백토백세포개소10(IL-10)기인적cDNA,병탐토기생물신식학공능,진일보통과증강형록색형광단백(EGFP)융합단백실현해기인아세포수평적표체정위.실험채용RT-PCR방법극륭토IL-10기인적cDNA,초보진행생물신식학분석,구건함유EGFP보고기인적융합표체재체pEGFP-IL-10.지질체(LTX)개도기인전염NIH-3T3세포,48 h후재형광도치현미경하관찰기인표체산물적분포,RT-PCR검측mRNA재체외수평적표체.결과표명:실험성공극륭출토IL-10기인537 bp장적완정편마구(CDS),공편마178개안기산,GenBank등록호위NM_001082045;IL-10단백적분자량위20.15 ku,이론등전점위8.20;신호태구역예측결과현시,IL-10단백함유일소단신호태서렬,속우분비형단백,병차신호태매적절할위치재제21화제22개안기산지간;형광도치현미경관찰결과발현,융합단백재세포질중표체,이전염pEGFP-C1후형광단백균균분포우정개세포;RT-PCR검측mRNA표체명현.결과현시,융합표체재체pEGFP-IL-10구건성공,병재세포중명현표체,위진일보연구IL-10적생물학공능전정기출.
