徐州工程学院学报（自然科学版）
徐州工程學院學報（自然科學版）
서주공정학원학보（자연과학판）
JOURNAL OF XUZHOU INSTITUTE OF TECHNOLOGY(NATURAL SCIENCES EDITION)
2014年
1期
31-35
,共5页
高兆建%王东星%王红建%苗倩钦
高兆建%王東星%王紅建%苗倩欽
고조건%왕동성%왕홍건%묘천흠
弹性蛋白酶%基因克隆%表达%分析
彈性蛋白酶%基因剋隆%錶達%分析
탄성단백매%기인극륭%표체%분석
从假单胞菌(Pseudomonas sp.)XZG36中克隆弹性蛋白酶基因,构建原核表达载体,实现其在大肠杆菌(Escherichia coli)中的高效表达,并对表达产物进行酶学性质分析,为微生物发酵生产弹性蛋白酶奠定基础.以假单胞菌基因组DNA为模板,PCR扩增弹性蛋白酶基因,并将其开放阅读框(ORF)克隆至融合表达载体pET30a(+)进一步IPTG诱导表达;表达产物经His·Bind亲和层析纯化后对弹性蛋白酶进行酶学性质分析.实验成功克隆了弹性蛋白酶基因,DNA基因片段为1672 bp、编码497个氨基酸残基的多肽,与预计长度相符合;实现了其在E.coli中的高效表达,表达量约占菌体总蛋白的20％;经SDS-PAGE分析,相对分子质量为48 000,与预期的一致;提纯后的表达蛋白SDS-PAGE分析可见单一条带,纯度可达92 ％以上.表达蛋白具有良好活性.
從假單胞菌(Pseudomonas sp.)XZG36中剋隆彈性蛋白酶基因,構建原覈錶達載體,實現其在大腸桿菌(Escherichia coli)中的高效錶達,併對錶達產物進行酶學性質分析,為微生物髮酵生產彈性蛋白酶奠定基礎.以假單胞菌基因組DNA為模闆,PCR擴增彈性蛋白酶基因,併將其開放閱讀框(ORF)剋隆至融閤錶達載體pET30a(+)進一步IPTG誘導錶達;錶達產物經His·Bind親和層析純化後對彈性蛋白酶進行酶學性質分析.實驗成功剋隆瞭彈性蛋白酶基因,DNA基因片段為1672 bp、編碼497箇氨基痠殘基的多肽,與預計長度相符閤;實現瞭其在E.coli中的高效錶達,錶達量約佔菌體總蛋白的20％;經SDS-PAGE分析,相對分子質量為48 000,與預期的一緻;提純後的錶達蛋白SDS-PAGE分析可見單一條帶,純度可達92 ％以上.錶達蛋白具有良好活性.
종가단포균(Pseudomonas sp.)XZG36중극륭탄성단백매기인,구건원핵표체재체,실현기재대장간균(Escherichia coli)중적고효표체,병대표체산물진행매학성질분석,위미생물발효생산탄성단백매전정기출.이가단포균기인조DNA위모판,PCR확증탄성단백매기인,병장기개방열독광(ORF)극륭지융합표체재체pET30a(+)진일보IPTG유도표체;표체산물경His·Bind친화층석순화후대탄성단백매진행매학성질분석.실험성공극륭료탄성단백매기인,DNA기인편단위1672 bp、편마497개안기산잔기적다태,여예계장도상부합;실현료기재E.coli중적고효표체,표체량약점균체총단백적20％;경SDS-PAGE분석,상대분자질량위48 000,여예기적일치;제순후적표체단백SDS-PAGE분석가견단일조대,순도가체92 ％이상.표체단백구유량호활성.
