宁夏医科大学学报
寧夏醫科大學學報
저하의과대학학보
JOURNAL OF NINGXIA MEDICAL COLLEGE
2014年
4期
409-413,封4
,共6页
王玉姣%王浩%赵嘉庆%何鑫%王程铖%王强%赵巍
王玉姣%王浩%趙嘉慶%何鑫%王程鋮%王彊%趙巍
왕옥교%왕호%조가경%하흠%왕정성%왕강%조외
细粒棘球蚴%重组细粒棘球蚴(中国大陆株)线粒体苹果酸脱氢酶%蛋白纯化%Western blot鉴定
細粒棘毬蚴%重組細粒棘毬蚴(中國大陸株)線粒體蘋果痠脫氫酶%蛋白純化%Western blot鑒定
세립극구유%중조세립극구유(중국대륙주)선립체평과산탈경매%단백순화%Western blot감정
Echinococcus granulosus%rEgmMDH%protein purification%Western blot identification
目的 通过原核表达细粒棘球蚴(中国大陆株)线粒体苹果酸脱氢酶(EgmMDH),获取高纯度的可溶性的重组细粒棘球蚴线粒体苹果酸脱氢酶(rEgmMDH).方法 从细粒棘球蚴(中国大陆株)中获得基因mdh并克隆到原核表达载体pET28a;通过IPTG诱导表达线粒体苹果酸脱氢酶(mMDH),进而采用亲和层析的方法纯化该包涵体目的蛋白并复性,获得可溶性目的蛋白rEgmMDH;利用细粒棘球蚴(中国大陆株)攻击感染家兔后获得血清;分别采用抗原头蚴兔血清和抗His-Tag鼠单克隆抗体对可溶性rEgmMDH进行Westernblot鉴定.结果 ①成功构建原核表达载体pET28a-mMDH/BL21;②通过亲和层析及复性,获得高纯度可溶性目的蛋白rEgmMDH;③Western blot结果表明,抗原头蚴兔血清和抗His-Tag鼠单克隆抗体可分别特异性鉴定该复性可溶性rEgmMDH.结论 通过本研究获得高纯度可溶性rEgmMDH,为进一步研究其在细粒棘球蚴感染宿主过程中的作用奠定基础.
目的 通過原覈錶達細粒棘毬蚴(中國大陸株)線粒體蘋果痠脫氫酶(EgmMDH),穫取高純度的可溶性的重組細粒棘毬蚴線粒體蘋果痠脫氫酶(rEgmMDH).方法 從細粒棘毬蚴(中國大陸株)中穫得基因mdh併剋隆到原覈錶達載體pET28a;通過IPTG誘導錶達線粒體蘋果痠脫氫酶(mMDH),進而採用親和層析的方法純化該包涵體目的蛋白併複性,穫得可溶性目的蛋白rEgmMDH;利用細粒棘毬蚴(中國大陸株)攻擊感染傢兔後穫得血清;分彆採用抗原頭蚴兔血清和抗His-Tag鼠單剋隆抗體對可溶性rEgmMDH進行Westernblot鑒定.結果 ①成功構建原覈錶達載體pET28a-mMDH/BL21;②通過親和層析及複性,穫得高純度可溶性目的蛋白rEgmMDH;③Western blot結果錶明,抗原頭蚴兔血清和抗His-Tag鼠單剋隆抗體可分彆特異性鑒定該複性可溶性rEgmMDH.結論 通過本研究穫得高純度可溶性rEgmMDH,為進一步研究其在細粒棘毬蚴感染宿主過程中的作用奠定基礎.
목적 통과원핵표체세립극구유(중국대륙주)선립체평과산탈경매(EgmMDH),획취고순도적가용성적중조세립극구유선립체평과산탈경매(rEgmMDH).방법 종세립극구유(중국대륙주)중획득기인mdh병극륭도원핵표체재체pET28a;통과IPTG유도표체선립체평과산탈경매(mMDH),진이채용친화층석적방법순화해포함체목적단백병복성,획득가용성목적단백rEgmMDH;이용세립극구유(중국대륙주)공격감염가토후획득혈청;분별채용항원두유토혈청화항His-Tag서단극륭항체대가용성rEgmMDH진행Westernblot감정.결과 ①성공구건원핵표체재체pET28a-mMDH/BL21;②통과친화층석급복성,획득고순도가용성목적단백rEgmMDH;③Western blot결과표명,항원두유토혈청화항His-Tag서단극륭항체가분별특이성감정해복성가용성rEgmMDH.결론 통과본연구획득고순도가용성rEgmMDH,위진일보연구기재세립극구유감염숙주과정중적작용전정기출.
