CAJ | 학술논문

针对猪脑心肌炎病毒(EMCV)基因组保守区域,设计并合成了特异性引物和TaqMan探针,建立了EMCV的TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法.通过常规RT-PCR方法扩增EMCV保守序列并将其连入pMD19-T载体,制备阳性标准质粒,优化反应条件,以10倍梯度稀释的标准品绘制标准曲线,EMCV标准曲线的相关系数为0.999.结果显示,该方法检测灵敏度达到10拷贝/μL,对猪捷申病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、猪传染性胃肠炎病毒检测结果均为阴性.方法重复性好,批内和批间变异系数均小于2％.检测采集自上海供港猪场、进境美国种猪、加拿大、法国种猪的血清样本145份,EMCV核酸的检出率国内猪场53.6％,美国猪检出率为27.6％,加拿大猪检出率为20％,法国猪检出率为26.7％.EMCV实时荧光RT-PCR方法的建立为该病的快速诊断和流行病学调查提供了有效手段.
침대저뇌심기염병독(EMCV)기인조보수구역,설계병합성료특이성인물화TaqMan탐침,건립료EMCV적TaqMan실시형광정량RT-PCR방법.통과상규RT-PCR방법확증EMCV보수서렬병장기련입pMD19-T재체,제비양성표준질립,우화반응조건,이10배제도희석적표준품회제표준곡선,EMCV표준곡선적상관계수위0.999.결과현시,해방법검측령민도체도10고패/μL,대저첩신병독、저번식여호흡종합정병독、저온병독、을형뇌염병독、저전염성위장염병독검측결과균위음성.방법중복성호,비내화비간변이계수균소우2％.검측채집자상해공항저장、진경미국충저、가나대、법국충저적혈청양본145빈,EMCV핵산적검출솔국내저장53.6％,미국저검출솔위27.6％,가나대저검출솔위20％,법국저검출솔위26.7％.EMCV실시형광RT-PCR방법적건립위해병적쾌속진단화류행병학조사제공료유효수단.