CAJ | 학술논문

建立柑橘黄龙病(HLB)可视化环介导等温扩增(LAMP)检测方法,为HLB的快速检测提供有力的技术支持.根据LAMP技术原理,针对柑橘黄龙病菌16S rDNA靶序列的6个位点设计4条特异性引物,通过对反应体系和反应条件的优化,并在反应前的体系中加入1∶10的钙黄绿素(calcein)和氯化锰(MnCl2)混合液作为荧光显色剂,建立可视化LAMP检测技术,同时对该技术的特异性、灵敏度和样品检测进行了测试.该检测方法具有很高的特异性,反应体系中除了HLB具有特异性的扩增,产生黄绿色荧光扩增产物,其他供试菌株均无特异扩增.对柑橘黄龙病菌总DNA的检测限为1.51×1O-3 ng/μL,而对含有目的基因的CG-pMD18-T质粒DNA的检测限为2.12×10-6 ng/μL,与定量PCR灵敏度相当,而比常规PCR灵敏度高1 000倍.利用可视化LAMP技术和定量PCR对来自漳州、南平、福州等地的样品进行检测,结果2种技术的检出率均为76.7％,符合率达到100％.
건립감귤황룡병(HLB)가시화배개도등온확증(LAMP)검측방법,위HLB적쾌속검측제공유력적기술지지.근거LAMP기술원리,침대감귤황룡병균16S rDNA파서렬적6개위점설계4조특이성인물,통과대반응체계화반응조건적우화,병재반응전적체계중가입1∶10적개황록소(calcein)화록화맹(MnCl2)혼합액작위형광현색제,건립가시화LAMP검측기술,동시대해기술적특이성、령민도화양품검측진행료측시.해검측방법구유흔고적특이성,반응체계중제료HLB구유특이성적확증,산생황록색형광확증산물,기타공시균주균무특이확증.대감귤황룡병균총DNA적검측한위1.51×1O-3 ng/μL,이대함유목적기인적CG-pMD18-T질립DNA적검측한위2.12×10-6 ng/μL,여정량PCR령민도상당,이비상규PCR령민도고1 000배.이용가시화LAMP기술화정량PCR대래자장주、남평、복주등지적양품진행검측,결과2충기술적검출솔균위76.7％,부합솔체도100％.