食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2013年
9期
245-249
,共5页
朱龙宝%葛飞%李婉珍%陶玉贵
硃龍寶%葛飛%李婉珍%陶玉貴
주룡보%갈비%리완진%도옥귀
乳酸脱氢酶%重组干酪乳酸菌%高效表达%发酵特性
乳痠脫氫酶%重組榦酪乳痠菌%高效錶達%髮酵特性
유산탈경매%중조간락유산균%고효표체%발효특성
乳酸脱氢酶(LDH)是干酪乳酸菌L.casei)合成L-乳酸途径中的关键酶,通过构建过量表达乳酸脱氢酶的重组干酪乳杆菌,提高干酪乳杆菌发酵产乳酸的能力.根据干酪乳杆菌乳酸脱氢酶的基因序列设计引物,PCR扩增获得乳酸脱氢酶基因(ldh),将其连接到乳酸杆菌穿梭质粒pMG36e,构建重组质粒pMG-ldh,电转入L.casei,利用红霉素MRS平板筛选阳性克隆,获得表达乳酸脱氢酶的重组菌L.casei pMG-ldh,SDS-PAGE和酶活分析结果表明成功表达了一个约37kD的乳酸脱氢酶蛋白,重组酶活力最高达95U/mL,较原始菌23U/mL提高了近3.1倍.为进一步提高其产乳酸能力,添加4mmol/L激活剂FBP和8mg/L烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)前体物烟酸,结果表明:重组菌L.caseipMG-ldh乳酸积累128.2g/L,生产强度达到3.04g/(L·h),较原始菌株L.casei分别提高了35％和53％,发酵周期缩短6h.
乳痠脫氫酶(LDH)是榦酪乳痠菌L.casei)閤成L-乳痠途徑中的關鍵酶,通過構建過量錶達乳痠脫氫酶的重組榦酪乳桿菌,提高榦酪乳桿菌髮酵產乳痠的能力.根據榦酪乳桿菌乳痠脫氫酶的基因序列設計引物,PCR擴增穫得乳痠脫氫酶基因(ldh),將其連接到乳痠桿菌穿梭質粒pMG36e,構建重組質粒pMG-ldh,電轉入L.casei,利用紅黴素MRS平闆篩選暘性剋隆,穫得錶達乳痠脫氫酶的重組菌L.casei pMG-ldh,SDS-PAGE和酶活分析結果錶明成功錶達瞭一箇約37kD的乳痠脫氫酶蛋白,重組酶活力最高達95U/mL,較原始菌23U/mL提高瞭近3.1倍.為進一步提高其產乳痠能力,添加4mmol/L激活劑FBP和8mg/L煙酰胺腺嘌呤二覈苷痠(NADH)前體物煙痠,結果錶明:重組菌L.caseipMG-ldh乳痠積纍128.2g/L,生產彊度達到3.04g/(L·h),較原始菌株L.casei分彆提高瞭35％和53％,髮酵週期縮短6h.
유산탈경매(LDH)시간락유산균L.casei)합성L-유산도경중적관건매,통과구건과량표체유산탈경매적중조간락유간균,제고간락유간균발효산유산적능력.근거간락유간균유산탈경매적기인서렬설계인물,PCR확증획득유산탈경매기인(ldh),장기련접도유산간균천사질립pMG36e,구건중조질립pMG-ldh,전전입L.casei,이용홍매소MRS평판사선양성극륭,획득표체유산탈경매적중조균L.casei pMG-ldh,SDS-PAGE화매활분석결과표명성공표체료일개약37kD적유산탈경매단백,중조매활력최고체95U/mL,교원시균23U/mL제고료근3.1배.위진일보제고기산유산능력,첨가4mmol/L격활제FBP화8mg/L연선알선표령이핵감산(NADH)전체물연산,결과표명:중조균L.caseipMG-ldh유산적루128.2g/L,생산강도체도3.04g/(L·h),교원시균주L.casei분별제고료35％화53％,발효주기축단6h.
