食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2013年
9期
262-266
,共5页
韩学易%唐自钟%王丽华%陈惠
韓學易%唐自鐘%王麗華%陳惠
한학역%당자종%왕려화%진혜
枯草芽孢杆菌%角蛋白酶%kerC基因%毕赤酵母%高效表达
枯草芽孢桿菌%角蛋白酶%kerC基因%畢赤酵母%高效錶達
고초아포간균%각단백매%kerC기인%필적효모%고효표체
以角蛋白酶基因为研究对象,构建毕赤酵母(Pichia pastoris)稳定的高效表达系统.采用PCR方法从枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B-3中克隆得到角蛋白酶基因kerC,将其构建在毕赤酵母表达载体pPICZαA上,得到重组质粒pPICZαA-kerC,转入毕赤酵母X-33中,成功实现了角蛋白酶基因kerC在真核表达系统中的高效表达.重组菌株以体积分数1％的甲醇诱导培养108h后,酶活力可达32.31U/mL,提高了11.15倍.重组酶最适温度为60℃,最适pH值为7.5,反应体系中3mmol/L的Co2+、Fe2+和Ca2+能明显增强其酶活力.SDS-PAGE检测表明,重组酶分子质量约为31kD.
以角蛋白酶基因為研究對象,構建畢赤酵母(Pichia pastoris)穩定的高效錶達繫統.採用PCR方法從枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)B-3中剋隆得到角蛋白酶基因kerC,將其構建在畢赤酵母錶達載體pPICZαA上,得到重組質粒pPICZαA-kerC,轉入畢赤酵母X-33中,成功實現瞭角蛋白酶基因kerC在真覈錶達繫統中的高效錶達.重組菌株以體積分數1％的甲醇誘導培養108h後,酶活力可達32.31U/mL,提高瞭11.15倍.重組酶最適溫度為60℃,最適pH值為7.5,反應體繫中3mmol/L的Co2+、Fe2+和Ca2+能明顯增彊其酶活力.SDS-PAGE檢測錶明,重組酶分子質量約為31kD.
이각단백매기인위연구대상,구건필적효모(Pichia pastoris)은정적고효표체계통.채용PCR방법종고초아포간균(Bacillus subtilis)B-3중극륭득도각단백매기인kerC,장기구건재필적효모표체재체pPICZαA상,득도중조질립pPICZαA-kerC,전입필적효모X-33중,성공실현료각단백매기인kerC재진핵표체계통중적고효표체.중조균주이체적분수1％적갑순유도배양108h후,매활력가체32.31U/mL,제고료11.15배.중조매최괄온도위60℃,최괄pH치위7.5,반응체계중3mmol/L적Co2+、Fe2+화Ca2+능명현증강기매활력.SDS-PAGE검측표명,중조매분자질량약위31kD.
