食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2013年
23期
250-255
,共6页
詹冬玲%任玉雪%李克剑%闵伟红%刘洋%张英文%刘景圣
詹鼕玲%任玉雪%李剋劍%閔偉紅%劉洋%張英文%劉景聖
첨동령%임옥설%리극검%민위홍%류양%장영문%류경골
磷酸三酯酶%突变体%真核表达%性质
燐痠三酯酶%突變體%真覈錶達%性質
린산삼지매%돌변체%진핵표체%성질
phosphotriesterase(PTE)%mutant%eukaryotic expression%properties
通过同源序列比对和晶体结构分析,嗜热菌Geobacillus kaustophilus HTA426磷酸三酯酶的H23位点高度保守,并且位于金属离子结合位点附近.结合Rosseta design程序设计,本实验将突变体H23A在毕赤酵母GS115中高效表达.通过组氨酸标签镍柱分离纯化、非变性蛋白电泳和Western blotting鉴定表达产物,证明该突变体酶主要是以介于单体和二聚体之间的寡聚形式存在.初步酶学性质研究表明,突变体酶是别构酶,Vmax为92.45U/mg,Hill系数h为1.98;最适温度为70℃,最适pH值为10.0; 70℃的热稳定性良好,半衰期为5.1h,而且大多数二价金属离子对突变体H23A都有激活作用.
通過同源序列比對和晶體結構分析,嗜熱菌Geobacillus kaustophilus HTA426燐痠三酯酶的H23位點高度保守,併且位于金屬離子結閤位點附近.結閤Rosseta design程序設計,本實驗將突變體H23A在畢赤酵母GS115中高效錶達.通過組氨痠標籤鎳柱分離純化、非變性蛋白電泳和Western blotting鑒定錶達產物,證明該突變體酶主要是以介于單體和二聚體之間的寡聚形式存在.初步酶學性質研究錶明,突變體酶是彆構酶,Vmax為92.45U/mg,Hill繫數h為1.98;最適溫度為70℃,最適pH值為10.0; 70℃的熱穩定性良好,半衰期為5.1h,而且大多數二價金屬離子對突變體H23A都有激活作用.
통과동원서렬비대화정체결구분석,기열균Geobacillus kaustophilus HTA426린산삼지매적H23위점고도보수,병차위우금속리자결합위점부근.결합Rosseta design정서설계,본실험장돌변체H23A재필적효모GS115중고효표체.통과조안산표첨얼주분리순화、비변성단백전영화Western blotting감정표체산물,증명해돌변체매주요시이개우단체화이취체지간적과취형식존재.초보매학성질연구표명,돌변체매시별구매,Vmax위92.45U/mg,Hill계수h위1.98;최괄온도위70℃,최괄pH치위10.0; 70℃적열은정성량호,반쇠기위5.1h,이차대다수이개금속리자대돌변체H23A도유격활작용.
