食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2013年
23期
200-205
,共6页
张洁%张梁%黄武宁%石贵阳
張潔%張樑%黃武寧%石貴暘
장길%장량%황무저%석귀양
氨肽酶%重组表达%酶反应
氨肽酶%重組錶達%酶反應
안태매%중조표체%매반응
aminopeptidase%recombinant expression%enzymatic reaction
PCR扩增Bacillus licheniformis 14580、Bacillus subtilis 168、Geobacillus stearothermophilus IFO12589氨肽酶基因,分别酶切连接表达质粒pET-28a,构建重组表达载体pET28a-BLAP、pET28a-BSAP、pET28a-GSAP,酶活力检测表明3个氨肽酶基因均在大肠杆菌宿主BL21(DE3)中获得重组表达.进一步对3株重组菌的氨肽酶粗酶液反应条件进行比较研究,结果表明:重组氨肽酶BSAP与GSAP的粗酶活较高,达到1500U/L以上;BLAP、BSAP、GSAP粗酶的最适酶反应温度分别为50、75、60℃,BSAP温度稳定性最好,在30～70℃时比较稳定;3种重组氨肽酶的最适pH值都是9.0,pH值在8.5～9.0时比较稳定;0.1mmol/L Co2+对酶活有较强的激活作用,BSAP的相对酶活力最高达到195.6％,其他二价金属离子对酶活均有不同程度的抑制,其中Zn2+抑制作用最大;重组质粒pET28a-BSAP、pET28a-GSAP在大肠杆菌中较pET28a-BLAP稳定.
PCR擴增Bacillus licheniformis 14580、Bacillus subtilis 168、Geobacillus stearothermophilus IFO12589氨肽酶基因,分彆酶切連接錶達質粒pET-28a,構建重組錶達載體pET28a-BLAP、pET28a-BSAP、pET28a-GSAP,酶活力檢測錶明3箇氨肽酶基因均在大腸桿菌宿主BL21(DE3)中穫得重組錶達.進一步對3株重組菌的氨肽酶粗酶液反應條件進行比較研究,結果錶明:重組氨肽酶BSAP與GSAP的粗酶活較高,達到1500U/L以上;BLAP、BSAP、GSAP粗酶的最適酶反應溫度分彆為50、75、60℃,BSAP溫度穩定性最好,在30～70℃時比較穩定;3種重組氨肽酶的最適pH值都是9.0,pH值在8.5～9.0時比較穩定;0.1mmol/L Co2+對酶活有較彊的激活作用,BSAP的相對酶活力最高達到195.6％,其他二價金屬離子對酶活均有不同程度的抑製,其中Zn2+抑製作用最大;重組質粒pET28a-BSAP、pET28a-GSAP在大腸桿菌中較pET28a-BLAP穩定.
PCR확증Bacillus licheniformis 14580、Bacillus subtilis 168、Geobacillus stearothermophilus IFO12589안태매기인,분별매절련접표체질립pET-28a,구건중조표체재체pET28a-BLAP、pET28a-BSAP、pET28a-GSAP,매활력검측표명3개안태매기인균재대장간균숙주BL21(DE3)중획득중조표체.진일보대3주중조균적안태매조매액반응조건진행비교연구,결과표명:중조안태매BSAP여GSAP적조매활교고,체도1500U/L이상;BLAP、BSAP、GSAP조매적최괄매반응온도분별위50、75、60℃,BSAP온도은정성최호,재30～70℃시비교은정;3충중조안태매적최괄pH치도시9.0,pH치재8.5～9.0시비교은정;0.1mmol/L Co2+대매활유교강적격활작용,BSAP적상대매활력최고체도195.6％,기타이개금속리자대매활균유불동정도적억제,기중Zn2+억제작용최대;중조질립pET28a-BSAP、pET28a-GSAP재대장간균중교pET28a-BLAP은정.
