食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2014年
3期
128-133
,共6页
陈鹏%封雪%王磊%邓丹丹%李学俊
陳鵬%封雪%王磊%鄧丹丹%李學俊
진붕%봉설%왕뢰%산단단%리학준
原核表达%过敏蛋白%免疫性质%模拟胃肠消化
原覈錶達%過敏蛋白%免疫性質%模擬胃腸消化
원핵표체%과민단백%면역성질%모의위장소화
overexpression%allergenic protein%immunological properties%simulated gastrointestinal digestion
以苦荞种子灌浆期cDNA文库中获得的苦养10kD过敏原基因序列TBAP10(tartary buckwheat 10 kD allergen protein,TBAP10; GenBank登录号JK729379.1)为基础,构建重组表达载体pET4 7b-TBAP10,重组蛋白在大肠杆菌BL21 Star (DE3)中以包涵体形式表达.经包涵体复性和钴离子螯合层析纯化目的蛋白,并对其过敏活性、热稳定性及在模拟胃肠环境中的稳定性进行了分析.Western blotting显示该蛋白与苦荞16kD过敏蛋白Fag t2存在免疫交叉反应.竞争性ELISA证明重组蛋白TBAP10具有与荞麦过敏患者血清IgE特异的结合活性;TBAP10具有强的热稳定性,能耐受15 min的沸水浴;模拟胃肠环境的消化结果显示TBAP10对胃蛋白酶具有强的耐受性,但对胰蛋白酶无耐受性.
以苦蕎種子灌漿期cDNA文庫中穫得的苦養10kD過敏原基因序列TBAP10(tartary buckwheat 10 kD allergen protein,TBAP10; GenBank登錄號JK729379.1)為基礎,構建重組錶達載體pET4 7b-TBAP10,重組蛋白在大腸桿菌BL21 Star (DE3)中以包涵體形式錶達.經包涵體複性和鈷離子螯閤層析純化目的蛋白,併對其過敏活性、熱穩定性及在模擬胃腸環境中的穩定性進行瞭分析.Western blotting顯示該蛋白與苦蕎16kD過敏蛋白Fag t2存在免疫交扠反應.競爭性ELISA證明重組蛋白TBAP10具有與蕎麥過敏患者血清IgE特異的結閤活性;TBAP10具有彊的熱穩定性,能耐受15 min的沸水浴;模擬胃腸環境的消化結果顯示TBAP10對胃蛋白酶具有彊的耐受性,但對胰蛋白酶無耐受性.
이고교충자관장기cDNA문고중획득적고양10kD과민원기인서렬TBAP10(tartary buckwheat 10 kD allergen protein,TBAP10; GenBank등록호JK729379.1)위기출,구건중조표체재체pET4 7b-TBAP10,중조단백재대장간균BL21 Star (DE3)중이포함체형식표체.경포함체복성화고리자오합층석순화목적단백,병대기과민활성、열은정성급재모의위장배경중적은정성진행료분석.Western blotting현시해단백여고교16kD과민단백Fag t2존재면역교차반응.경쟁성ELISA증명중조단백TBAP10구유여교맥과민환자혈청IgE특이적결합활성;TBAP10구유강적열은정성,능내수15 min적비수욕;모의위장배경적소화결과현시TBAP10대위단백매구유강적내수성,단대이단백매무내수성.
