食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2014年
3期
122-127
,共6页
毛海燕%蔡娜%陈亨莉%曹敏杰%蔡秋凤%刘光明
毛海燕%蔡娜%陳亨莉%曹敏傑%蔡鞦鳳%劉光明
모해연%채나%진형리%조민걸%채추봉%류광명
拟穴青蟹%新型过敏原%肌质钙结合蛋白%纯化%质谱分析%分子克隆%生物信息学分析
擬穴青蟹%新型過敏原%肌質鈣結閤蛋白%純化%質譜分析%分子剋隆%生物信息學分析
의혈청해%신형과민원%기질개결합단백%순화%질보분석%분자극륭%생물신식학분석
Scylla paramamosain%novel allergen%sarcoplasmic calcium binding protein%purification%mass spectrometry%cloning%bioinformatics analysis
为进一步认识蟹类的过敏原,采用免疫印迹方法,分析发现甲壳类过敏患者血清能与拟穴青蟹肌浆蛋白中分子质量约为21 kD的蛋白质产生特异的IgE结合反应,结果显示该蛋白可能是蟹类新型过敏原.通过硫酸铵盐析、阴离子交换和凝胶过滤柱层析等方法对21kD-蛋白进行分离纯化,采用Western blotting和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization-time of flight-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)确认纯化的21 kD-蛋白为肌质钙结合蛋白(sarcoplasmic calcium binding protein,SCP).采用SMART-RACE (Switching Mechanism At RNA Termini-Rapid Amplification of cDNA Ends)的方法获得SCP的cDNA序列,该序列全长986 bp,开放阅读框为579 bp,编码193个氨基酸,其理论分子质量21.94kD,等电点4.44.拟穴青蟹SCP与甲壳类动物SCP具有较高的同源性,与昆虫SCP的同源性较差;三级结构模拟分析显示,SCP含有5个螺旋-转角-螺旋结构区,即EF-手型结构区,并在其中两个手型结构区形成2个钙离子结合位点;进一步预测得到SCP的4个线性抗原表位和3个构象性抗原表位.
為進一步認識蟹類的過敏原,採用免疫印跡方法,分析髮現甲殼類過敏患者血清能與擬穴青蟹肌漿蛋白中分子質量約為21 kD的蛋白質產生特異的IgE結閤反應,結果顯示該蛋白可能是蟹類新型過敏原.通過硫痠銨鹽析、陰離子交換和凝膠過濾柱層析等方法對21kD-蛋白進行分離純化,採用Western blotting和基質輔助激光解析電離飛行時間質譜(matrix assisted laser desorption ionization-time of flight-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)確認純化的21 kD-蛋白為肌質鈣結閤蛋白(sarcoplasmic calcium binding protein,SCP).採用SMART-RACE (Switching Mechanism At RNA Termini-Rapid Amplification of cDNA Ends)的方法穫得SCP的cDNA序列,該序列全長986 bp,開放閱讀框為579 bp,編碼193箇氨基痠,其理論分子質量21.94kD,等電點4.44.擬穴青蟹SCP與甲殼類動物SCP具有較高的同源性,與昆蟲SCP的同源性較差;三級結構模擬分析顯示,SCP含有5箇螺鏇-轉角-螺鏇結構區,即EF-手型結構區,併在其中兩箇手型結構區形成2箇鈣離子結閤位點;進一步預測得到SCP的4箇線性抗原錶位和3箇構象性抗原錶位.
위진일보인식해류적과민원,채용면역인적방법,분석발현갑각류과민환자혈청능여의혈청해기장단백중분자질량약위21 kD적단백질산생특이적IgE결합반응,결과현시해단백가능시해류신형과민원.통과류산안염석、음리자교환화응효과려주층석등방법대21kD-단백진행분리순화,채용Western blotting화기질보조격광해석전리비행시간질보(matrix assisted laser desorption ionization-time of flight-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)학인순화적21 kD-단백위기질개결합단백(sarcoplasmic calcium binding protein,SCP).채용SMART-RACE (Switching Mechanism At RNA Termini-Rapid Amplification of cDNA Ends)적방법획득SCP적cDNA서렬,해서렬전장986 bp,개방열독광위579 bp,편마193개안기산,기이론분자질량21.94kD,등전점4.44.의혈청해SCP여갑각류동물SCP구유교고적동원성,여곤충SCP적동원성교차;삼급결구모의분석현시,SCP함유5개라선-전각-라선결구구,즉EF-수형결구구,병재기중량개수형결구구형성2개개리자결합위점;진일보예측득도SCP적4개선성항원표위화3개구상성항원표위.
