食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2014年
5期
129-133
,共5页
张虹%都立辉%施荣华%刘琴
張虹%都立輝%施榮華%劉琴
장홍%도립휘%시영화%류금
植物乳杆菌%NP_785232蛋白%聚合酶链式反应%诱导表达%纯化
植物乳桿菌%NP_785232蛋白%聚閤酶鏈式反應%誘導錶達%純化
식물유간균%NP_785232단백%취합매련식반응%유도표체%순화
Lactobacillus plantarum%NP_785232 protein%polymerase chain reaction (PCR)%expression%purification
以植物乳杆菌KLDS 1.0320的候选表面黏附蛋白NP_785232为研究对象,采用外源重组表达的方法大量制备其前两个结构域.应用聚合酶链式反应方法克隆NP_785232蛋白N端的前两个结构域,将克隆获得的片段连入表达载体pET30a中构建重组质粒pET30a/N2,该重组质粒转化大肠杆菌后,用终浓度为1 mmol/L的异丙基硫代半乳糖苷诱导重组菌,重组蛋白经HisTrap柱纯化后进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,对电泳获得的目的大小的片段进行质谱鉴定.结果表明:获得的重组蛋白与NP_785232蛋白N端的前两个结构域完全相同.通过大肠杆菌表达系统可以有效表达植物乳杆菌KLDS1.0320的候选表面黏附蛋白NP_785232 N端的前两个结构域.
以植物乳桿菌KLDS 1.0320的候選錶麵黏附蛋白NP_785232為研究對象,採用外源重組錶達的方法大量製備其前兩箇結構域.應用聚閤酶鏈式反應方法剋隆NP_785232蛋白N耑的前兩箇結構域,將剋隆穫得的片段連入錶達載體pET30a中構建重組質粒pET30a/N2,該重組質粒轉化大腸桿菌後,用終濃度為1 mmol/L的異丙基硫代半乳糖苷誘導重組菌,重組蛋白經HisTrap柱純化後進行十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳,對電泳穫得的目的大小的片段進行質譜鑒定.結果錶明:穫得的重組蛋白與NP_785232蛋白N耑的前兩箇結構域完全相同.通過大腸桿菌錶達繫統可以有效錶達植物乳桿菌KLDS1.0320的候選錶麵黏附蛋白NP_785232 N耑的前兩箇結構域.
이식물유간균KLDS 1.0320적후선표면점부단백NP_785232위연구대상,채용외원중조표체적방법대량제비기전량개결구역.응용취합매련식반응방법극륭NP_785232단백N단적전량개결구역,장극륭획득적편단련입표체재체pET30a중구건중조질립pET30a/N2,해중조질립전화대장간균후,용종농도위1 mmol/L적이병기류대반유당감유도중조균,중조단백경HisTrap주순화후진행십이완기류산납-취병희선알응효전영,대전영획득적목적대소적편단진행질보감정.결과표명:획득적중조단백여NP_785232단백N단적전량개결구역완전상동.통과대장간균표체계통가이유효표체식물유간균KLDS1.0320적후선표면점부단백NP_785232 N단적전량개결구역.
