停乳链球菌isp基因的克隆与原核表达
정유련구균isp기인적극륭여원핵표체
Cloning and Prokaryotic Expression of Streptococcus dysgalactiae Gene isp
  • 万方数据
    微生物学杂志 미생물학잡지
    JOURNAL OF MICROBIOLOGY
    2014年 1期 53-57 ,共5页

    剧慧栋%李月颖%马宁%李晓丽%赵宝华%秦丽云%吕国平%郭玉梅%王苋

    극혜동%리월영%마저%리효려%조보화%진려운%려국평%곽옥매%왕현

    停乳链球菌%分泌蛋白%克隆%表达 停乳鏈毬菌%分泌蛋白%剋隆%錶達
    정유련구균%분비단백%극륭%표체
    Streptococcus dysgalactiae%secreted protein%cloning%expression
    根据GenBank报道的停乳链球菌(Streptococcus dysgalactiae)isp基因(GenBank:CP002215.1)序列设计引物,PCR扩增得到isp基因.片段大小为1 500 bp,与从GenBank下载的序列进行同源性比对结果为98.57％.将isp基因克隆于表达载体pET-25b,成功构建了重组质粒pET-25b-isp,将重组质粒分别转化BL21(DE3),将BL21(pET-25b-isp)阳性重组菌株经IPTG诱导后,SDS-PAGE结果显示均有蛋白表达,大小分别为53 ku与目的蛋白大小相符;Western blot检测显示,表达的蛋白为目的蛋白.对成功构建的菌株BL21(pET-25b-isp)表达条件经优化后,在温度37℃,诱导时间12 h,IPTG浓度为1 mmol/L时,蛋白有较高的表达量.
    근거GenBank보도적정유련구균(Streptococcus dysgalactiae)isp기인(GenBank:CP002215.1)서렬설계인물,PCR확증득도isp기인.편단대소위1 500 bp,여종GenBank하재적서렬진행동원성비대결과위98.57％.장isp기인극륭우표체재체pET-25b,성공구건료중조질립pET-25b-isp,장중조질립분별전화BL21(DE3),장BL21(pET-25b-isp)양성중조균주경IPTG유도후,SDS-PAGE결과현시균유단백표체,대소분별위53 ku여목적단백대소상부;Western blot검측현시,표체적단백위목적단백.대성공구건적균주BL21(pET-25b-isp)표체조건경우화후,재온도37℃,유도시간12 h,IPTG농도위1 mmol/L시,단백유교고적표체량.
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