华中师范大学学报（自然科学版）
華中師範大學學報（自然科學版）
화중사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF CENTRAL CHINA NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCES)
2014年
3期
392-398
,共7页
齐婷%刘婧%李倩%余金辉%袁永泽%刘德立
齊婷%劉婧%李倩%餘金輝%袁永澤%劉德立
제정%류청%리천%여금휘%원영택%류덕립
MgCYP51B%翻译起始区%稀有密码子%表达优化
MgCYP51B%翻譯起始區%稀有密碼子%錶達優化
MgCYP51B%번역기시구%희유밀마자%표체우화
Magnaporthe oryzae CYP51B%translational initiation region(TIR)%rare codon%optimization of expression
在大肠杆菌中异源表达稻瘟菌CYP51(P450-14DM,MgCYP51B)基因,通过对MgCYP51B进行跨膜区预测和同源模建分析,并截短稻瘟菌CYP51B基因,构建了9种不同的重组表达质粒以实现蛋白表达.结果表明:只有pET28-MgB-83在3种宿主菌中实现了表达,且在BL21(DE3) pLysS中表达量最大.通过对稀有密码子和mRNA翻译起始区二级结构进行分析,发现稀有密码子和mRNA翻译起始区二级结构稳定性对MgCYP51B蛋白的表达都有影响,适用于稀有密码子表达的Rossetta(DE3)并不适用于MgCYP51B基因的最优表达.同时只有翻译起始区二级结构自由能最低的pET28-MgB-83才能实现表达.本研究实现了稻瘟菌MgCYP51B基因在大肠杆菌中的异源表达,证实密码子的偏爱性和翻译起始区二级结构稳定性影响MgCYP51B蛋白表达.
在大腸桿菌中異源錶達稻瘟菌CYP51(P450-14DM,MgCYP51B)基因,通過對MgCYP51B進行跨膜區預測和同源模建分析,併截短稻瘟菌CYP51B基因,構建瞭9種不同的重組錶達質粒以實現蛋白錶達.結果錶明:隻有pET28-MgB-83在3種宿主菌中實現瞭錶達,且在BL21(DE3) pLysS中錶達量最大.通過對稀有密碼子和mRNA翻譯起始區二級結構進行分析,髮現稀有密碼子和mRNA翻譯起始區二級結構穩定性對MgCYP51B蛋白的錶達都有影響,適用于稀有密碼子錶達的Rossetta(DE3)併不適用于MgCYP51B基因的最優錶達.同時隻有翻譯起始區二級結構自由能最低的pET28-MgB-83纔能實現錶達.本研究實現瞭稻瘟菌MgCYP51B基因在大腸桿菌中的異源錶達,證實密碼子的偏愛性和翻譯起始區二級結構穩定性影響MgCYP51B蛋白錶達.
재대장간균중이원표체도온균CYP51(P450-14DM,MgCYP51B)기인,통과대MgCYP51B진행과막구예측화동원모건분석,병절단도온균CYP51B기인,구건료9충불동적중조표체질립이실현단백표체.결과표명:지유pET28-MgB-83재3충숙주균중실현료표체,차재BL21(DE3) pLysS중표체량최대.통과대희유밀마자화mRNA번역기시구이급결구진행분석,발현희유밀마자화mRNA번역기시구이급결구은정성대MgCYP51B단백적표체도유영향,괄용우희유밀마자표체적Rossetta(DE3)병불괄용우MgCYP51B기인적최우표체.동시지유번역기시구이급결구자유능최저적pET28-MgB-83재능실현표체.본연구실현료도온균MgCYP51B기인재대장간균중적이원표체,증실밀마자적편애성화번역기시구이급결구은정성영향MgCYP51B단백표체.
