西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA
2014年
5期
884-889
,共6页
毛双双%李玉红%周旋%李万青%陈菲帆%程智慧%陈鹏
毛雙雙%李玉紅%週鏇%李萬青%陳菲帆%程智慧%陳鵬
모쌍쌍%리옥홍%주선%리만청%진비범%정지혜%진붕
黄瓜%过敏性反应诱导蛋白基因%原核表达%多克隆抗体
黃瓜%過敏性反應誘導蛋白基因%原覈錶達%多剋隆抗體
황과%과민성반응유도단백기인%원핵표체%다극륭항체
cucumber%CsHIR1 gene%prokaryotic expression%polyclonal antibodies
该试验用黄瓜霜霉菌侵染黄瓜幼苗,并通过PCR方法克隆其过敏性诱导反应蛋白(HIR)的基因CsHIR1,构建原核表达载体pET28a-CsHIR1,实现在大肠杆菌(E.coli) BL21 (DE3)中的高效表达;对诱导表达的时间和IPTG的浓度进行了优化;利用钴离子螯合层析纯化了重组蛋白并制备高效价多克隆抗血清.结果表明:该黄瓜过敏性反应诱导蛋白以包涵体的形式表达,最佳诱导时间和IPTG浓度分别为4h和0.5 mmol·L-1;经纯化,得到高纯度的分子量为34 kD重组蛋白CsHIR1.Western blotting显示CsHIR1的抗体具有较好的特异性.原核表达体系的建立和多克隆抗体的制备为进一步研究CsHIR1基因在黄瓜中的功能奠定了基础.
該試驗用黃瓜霜黴菌侵染黃瓜幼苗,併通過PCR方法剋隆其過敏性誘導反應蛋白(HIR)的基因CsHIR1,構建原覈錶達載體pET28a-CsHIR1,實現在大腸桿菌(E.coli) BL21 (DE3)中的高效錶達;對誘導錶達的時間和IPTG的濃度進行瞭優化;利用鈷離子螯閤層析純化瞭重組蛋白併製備高效價多剋隆抗血清.結果錶明:該黃瓜過敏性反應誘導蛋白以包涵體的形式錶達,最佳誘導時間和IPTG濃度分彆為4h和0.5 mmol·L-1;經純化,得到高純度的分子量為34 kD重組蛋白CsHIR1.Western blotting顯示CsHIR1的抗體具有較好的特異性.原覈錶達體繫的建立和多剋隆抗體的製備為進一步研究CsHIR1基因在黃瓜中的功能奠定瞭基礎.
해시험용황과상매균침염황과유묘,병통과PCR방법극륭기과민성유도반응단백(HIR)적기인CsHIR1,구건원핵표체재체pET28a-CsHIR1,실현재대장간균(E.coli) BL21 (DE3)중적고효표체;대유도표체적시간화IPTG적농도진행료우화;이용고리자오합층석순화료중조단백병제비고효개다극륭항혈청.결과표명:해황과과민성반응유도단백이포함체적형식표체,최가유도시간화IPTG농도분별위4h화0.5 mmol·L-1;경순화,득도고순도적분자량위34 kD중조단백CsHIR1.Western blotting현시CsHIR1적항체구유교호적특이성.원핵표체체계적건립화다극륭항체적제비위진일보연구CsHIR1기인재황과중적공능전정료기출.
