西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA
2014年
5期
873-877
,共5页
赵兰杰%朱守鸿%张新宇%李艳军%孙杰%刘永昌
趙蘭傑%硃守鴻%張新宇%李豔軍%孫傑%劉永昌
조란걸%주수홍%장신우%리염군%손걸%류영창
拟南芥%AtPUB18%泛素连接酶%非生物胁迫
擬南芥%AtPUB18%汎素連接酶%非生物脅迫
의남개%AtPUB18%범소련접매%비생물협박
Arabidopsis thaliana%AtPUB18%E3 ligase%abiotic stress
通过RT-PCR技术从拟南芥中克隆到AtPUB18全长ORF.利用VectorNTI和MEGA 5.0对蛋白序列进行生物信息学分析结果显示,AtPUB18和AtPUB19蛋白序列相似性为74.9％,一致性为63.5％;构建AtPUB18启动子(1 974 bp)融合GUS报告基因载体并转化拟南芥,组织化学染色分析显示,低温和干旱诱导后转基因植株中AtPUB18表达水平显著提高;构建AtPUB18与绿色荧光蛋白基因(GFP)融合的瞬时表达载体并转化原生质体,激光共聚焦显微镜观察发现,AtPUB18-GFP融合蛋白分布在细胞核和细胞质中;构建AtPUB18与麦芽糖结合蛋白基因(MBP)融合表达载体并转化大肠杆菌表达融合蛋白,纯化后的蛋白进行泛素连接酶活性检测结果显示,在小麦泛素激活酶E1和人泛素结合酶E2存在时,AtPUB18具有泛素连接酶活性.研究表明,AtPUB18是一个有功能的泛素连接酶,定位在细胞膜和细胞质中,可能参与拟南芥对非生物胁迫的响应.
通過RT-PCR技術從擬南芥中剋隆到AtPUB18全長ORF.利用VectorNTI和MEGA 5.0對蛋白序列進行生物信息學分析結果顯示,AtPUB18和AtPUB19蛋白序列相似性為74.9％,一緻性為63.5％;構建AtPUB18啟動子(1 974 bp)融閤GUS報告基因載體併轉化擬南芥,組織化學染色分析顯示,低溫和榦旱誘導後轉基因植株中AtPUB18錶達水平顯著提高;構建AtPUB18與綠色熒光蛋白基因(GFP)融閤的瞬時錶達載體併轉化原生質體,激光共聚焦顯微鏡觀察髮現,AtPUB18-GFP融閤蛋白分佈在細胞覈和細胞質中;構建AtPUB18與麥芽糖結閤蛋白基因(MBP)融閤錶達載體併轉化大腸桿菌錶達融閤蛋白,純化後的蛋白進行汎素連接酶活性檢測結果顯示,在小麥汎素激活酶E1和人汎素結閤酶E2存在時,AtPUB18具有汎素連接酶活性.研究錶明,AtPUB18是一箇有功能的汎素連接酶,定位在細胞膜和細胞質中,可能參與擬南芥對非生物脅迫的響應.
통과RT-PCR기술종의남개중극륭도AtPUB18전장ORF.이용VectorNTI화MEGA 5.0대단백서렬진행생물신식학분석결과현시,AtPUB18화AtPUB19단백서렬상사성위74.9％,일치성위63.5％;구건AtPUB18계동자(1 974 bp)융합GUS보고기인재체병전화의남개,조직화학염색분석현시,저온화간한유도후전기인식주중AtPUB18표체수평현저제고;구건AtPUB18여록색형광단백기인(GFP)융합적순시표체재체병전화원생질체,격광공취초현미경관찰발현,AtPUB18-GFP융합단백분포재세포핵화세포질중;구건AtPUB18여맥아당결합단백기인(MBP)융합표체재체병전화대장간균표체융합단백,순화후적단백진행범소련접매활성검측결과현시,재소맥범소격활매E1화인범소결합매E2존재시,AtPUB18구유범소련접매활성.연구표명,AtPUB18시일개유공능적범소련접매,정위재세포막화세포질중,가능삼여의남개대비생물협박적향응.
