西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA
2014年
5期
866-872
,共7页
拟南芥%翻译后修饰%多聚ADP核糖聚合酶%原核表达
擬南芥%翻譯後脩飾%多聚ADP覈糖聚閤酶%原覈錶達
의남개%번역후수식%다취ADP핵당취합매%원핵표체
Arabidopsis%posttranslational modification%poly (ADP-ribose) polymerase%prokaryotic expression
采用RT-PCR技术获得了拟南芥多聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose) polymerase,PARP] PARP1基因的全长cDNA,转入原核表达载体pET32a并转化宿主菌Origami(DE3),加入终浓度为0.3 mmol/L IPTG,在16℃下诱导可获得较多的可溶重组蛋白.纯化TRX-PARP1,在反应液中加入NAD+和断裂DNA,通过SDS PAGE凝胶电泳和Western blotting分析,TRX-PARP1分子量可随着时间的延长逐渐增大,产生向上的弥散,表明蛋白质连上了ADP核糖分子;与此对比,作为参照的标签蛋白TRX无此现象.实验结果显示原核表达拟南芥PARP1能够催化自身多聚ADP核糖化修饰,为深入研究植物多聚ADP核糖聚合酶的功能奠定了基础.
採用RT-PCR技術穫得瞭擬南芥多聚ADP覈糖聚閤酶[poly(ADP-ribose) polymerase,PARP] PARP1基因的全長cDNA,轉入原覈錶達載體pET32a併轉化宿主菌Origami(DE3),加入終濃度為0.3 mmol/L IPTG,在16℃下誘導可穫得較多的可溶重組蛋白.純化TRX-PARP1,在反應液中加入NAD+和斷裂DNA,通過SDS PAGE凝膠電泳和Western blotting分析,TRX-PARP1分子量可隨著時間的延長逐漸增大,產生嚮上的瀰散,錶明蛋白質連上瞭ADP覈糖分子;與此對比,作為參照的標籤蛋白TRX無此現象.實驗結果顯示原覈錶達擬南芥PARP1能夠催化自身多聚ADP覈糖化脩飾,為深入研究植物多聚ADP覈糖聚閤酶的功能奠定瞭基礎.
채용RT-PCR기술획득료의남개다취ADP핵당취합매[poly(ADP-ribose) polymerase,PARP] PARP1기인적전장cDNA,전입원핵표체재체pET32a병전화숙주균Origami(DE3),가입종농도위0.3 mmol/L IPTG,재16℃하유도가획득교다적가용중조단백.순화TRX-PARP1,재반응액중가입NAD+화단렬DNA,통과SDS PAGE응효전영화Western blotting분석,TRX-PARP1분자량가수착시간적연장축점증대,산생향상적미산,표명단백질련상료ADP핵당분자;여차대비,작위삼조적표첨단백TRX무차현상.실험결과현시원핵표체의남개PARP1능구최화자신다취ADP핵당화수식,위심입연구식물다취ADP핵당취합매적공능전정료기출.
