中国防痨杂志
中國防癆雜誌
중국방로잡지
BULLETIN OF THE CHINESE ANTITUBERCULOSIS ASSOCIATION
2014年
6期
424-428
,共5页
梁艳%肖漓%白雪娟%高钰%阳幼荣%张晓燕%陈丹%王兰%史迎昌
樑豔%肖巑%白雪娟%高鈺%暘幼榮%張曉燕%陳丹%王蘭%史迎昌
량염%초리%백설연%고옥%양유영%장효연%진단%왕란%사영창
分枝杆菌,结核%疫苗,DNA%电穿孔%免疫
分枝桿菌,結覈%疫苗,DNA%電穿孔%免疫
분지간균,결핵%역묘,DNA%전천공%면역
Mycobacterium tuberculosis%Vaccines,DNA%Electroporation%Immunity
目的 研究不同剂量结核病DNA疫苗电转染后的免疫原性.方法 40只BALB/c小鼠通过随机数字表法分为8组,每组5只.其中4组分别用100 μl生理盐水和10 μg、50 μg、100 μg结核分枝杆菌Ag85A DNA肌内注射免疫小鼠;另4组用100 μl生理盐水和10 μg、50 μg、100 μgAg85ADNA肌内注射加电转染免疫小鼠.每2周免疫1次,共3次.最后1次免疫后2周杀死小鼠.用ELISA方法检测小鼠脾细胞培养上清液中γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(interleukin 4,IL-4)水平;用流式细胞术检测小鼠外周血单个核细胞(PBMC)分泌IFN-γ的辅助性T细胞(helper T cell,Th)1细胞百分比、分泌IL-4的Th2细胞百分比,以及Th1与Th2的细胞比值.用SAS 9.2软件处理数据,实验数据以“-x±s”表示,对有关数据进行两因素析因设计的方差分析,两两比较采用t检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 免疫结束后2周,小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ水平,50 μg[(646.05±342.53) pg/ml]和100 μgAg85ADNA肌内注射组[(738.61±372.68) pg/ml]显著高于生理盐水组[(1.73±3.88)pg/ml](f值分别为4.065、4.647,P值均＜0.05)和10 μg Ag85A DNA组[(87.83±120.82)pg/ml](t值分别为3.513、4.094,P值均＜0.05);10 μg Ag85A DNA电转染组[(357.06±105.18) pg/ml]显著高于生理盐水组(t=2.247,P＜0.05),高于100 μg Ag85ADNA电转染组[(86.08±135.73) pg/ml],但差异无统计学意义(t=1.706,P＞0.05);50 μg Ag85ADNA电转染组[(648.60±439.41)pg/ml]显著高于生理盐水组(t=4.081,P＜0.05)和100 μg Ag85A DNA电转染组(t=3.539,P＜0.05).与直接肌内注射组IFN-γ水平[(87.83±120.82) pg/ml]比较,10 μg Ag85A DNA电转染组增高3倍[(357.06 pg/ml)/(87.83 pg/ml)]; 50 μg Ag85A DNA肌内注射组[(646.05±342.53) pg/ml]与电转染组[(648.60±439.41)pg/ml]比较,差异无统计学意义(t=-0.016,P＞0.05);100 μg Ag85A DNA电转染组[(86.08±135.73)pg/ml]较肌内注射组[(738.61±372.68) pg/ml]降低88.35％(t=4.105,P＜0.05).小鼠PBMC分泌IFN-γ的Th1细胞百分比,不同剂量Ag85A DNA肌内注射组[10 μg Ag85A DNA:(1.39±0.84)％;50 μg Ag85A DNA:(1.55±0.33)％;100 μg Ag85A DNA:(2.13±0.47)％]和DNA电转染组[10 μg Ag85A DNA:(1.42±0.47)％; 50 μg Ag85A DNA:(1.88±0.51)％; 100 μg Ag85ADNA:(1.43±0.68)％]均高于生理盐水组[(0.65±0.31)％](t值分别为2.002、2.431、4.015、2.084、3.332和2.105,P值均＜0.05),但不同剂量Ag85A DNA电转染组与肌内注射组之间差异均无统计学意义(t值分别为0.081、0.901和-1.91,P值均＞0.05).小鼠PBMC分泌IL-4的Th2细胞百分比,不同剂量Ag85A DNA肌内注射组[10 μg Ag85A DNA:(1.42±1.18)％; 50 μg Ag85A DNA:(1.14±0.78)％; 100 μg Ag85A DNA:(1.24±0.76)％]和DNA电转染组[10 μg Ag85A DNA:(1.19±1.09)％; 50 μg Ag85A DNA:(2.06±0.96)％;100 μgAg85A DNA:(1.47±0.65)％]均显著低于生理盐水电转染组[(4.14±2.55)％](t值分别为-3.392、-3.738、-3.616、-3.676、-2.599和-3.325,P值均＜0.05),但不同剂量DNA肌内注射组与DNA电转染组之间差异无统计学意义(t值分别为0.284、-1.139和-0.292,P值均＞0.05).结论 DNA电转染免疫可以增强低剂量DNA疫苗的免疫应答,使用少量的DNA疫苗就可以产生较好的免疫效果.
目的 研究不同劑量結覈病DNA疫苗電轉染後的免疫原性.方法 40隻BALB/c小鼠通過隨機數字錶法分為8組,每組5隻.其中4組分彆用100 μl生理鹽水和10 μg、50 μg、100 μg結覈分枝桿菌Ag85A DNA肌內註射免疫小鼠;另4組用100 μl生理鹽水和10 μg、50 μg、100 μgAg85ADNA肌內註射加電轉染免疫小鼠.每2週免疫1次,共3次.最後1次免疫後2週殺死小鼠.用ELISA方法檢測小鼠脾細胞培養上清液中γ榦擾素(IFN-γ)和白細胞介素4(interleukin 4,IL-4)水平;用流式細胞術檢測小鼠外週血單箇覈細胞(PBMC)分泌IFN-γ的輔助性T細胞(helper T cell,Th)1細胞百分比、分泌IL-4的Th2細胞百分比,以及Th1與Th2的細胞比值.用SAS 9.2軟件處理數據,實驗數據以“-x±s”錶示,對有關數據進行兩因素析因設計的方差分析,兩兩比較採用t檢驗,P＜0.05為差異有統計學意義.結果 免疫結束後2週,小鼠脾淋巴細胞分泌IFN-γ水平,50 μg[(646.05±342.53) pg/ml]和100 μgAg85ADNA肌內註射組[(738.61±372.68) pg/ml]顯著高于生理鹽水組[(1.73±3.88)pg/ml](f值分彆為4.065、4.647,P值均＜0.05)和10 μg Ag85A DNA組[(87.83±120.82)pg/ml](t值分彆為3.513、4.094,P值均＜0.05);10 μg Ag85A DNA電轉染組[(357.06±105.18) pg/ml]顯著高于生理鹽水組(t=2.247,P＜0.05),高于100 μg Ag85ADNA電轉染組[(86.08±135.73) pg/ml],但差異無統計學意義(t=1.706,P＞0.05);50 μg Ag85ADNA電轉染組[(648.60±439.41)pg/ml]顯著高于生理鹽水組(t=4.081,P＜0.05)和100 μg Ag85A DNA電轉染組(t=3.539,P＜0.05).與直接肌內註射組IFN-γ水平[(87.83±120.82) pg/ml]比較,10 μg Ag85A DNA電轉染組增高3倍[(357.06 pg/ml)/(87.83 pg/ml)]; 50 μg Ag85A DNA肌內註射組[(646.05±342.53) pg/ml]與電轉染組[(648.60±439.41)pg/ml]比較,差異無統計學意義(t=-0.016,P＞0.05);100 μg Ag85A DNA電轉染組[(86.08±135.73)pg/ml]較肌內註射組[(738.61±372.68) pg/ml]降低88.35％(t=4.105,P＜0.05).小鼠PBMC分泌IFN-γ的Th1細胞百分比,不同劑量Ag85A DNA肌內註射組[10 μg Ag85A DNA:(1.39±0.84)％;50 μg Ag85A DNA:(1.55±0.33)％;100 μg Ag85A DNA:(2.13±0.47)％]和DNA電轉染組[10 μg Ag85A DNA:(1.42±0.47)％; 50 μg Ag85A DNA:(1.88±0.51)％; 100 μg Ag85ADNA:(1.43±0.68)％]均高于生理鹽水組[(0.65±0.31)％](t值分彆為2.002、2.431、4.015、2.084、3.332和2.105,P值均＜0.05),但不同劑量Ag85A DNA電轉染組與肌內註射組之間差異均無統計學意義(t值分彆為0.081、0.901和-1.91,P值均＞0.05).小鼠PBMC分泌IL-4的Th2細胞百分比,不同劑量Ag85A DNA肌內註射組[10 μg Ag85A DNA:(1.42±1.18)％; 50 μg Ag85A DNA:(1.14±0.78)％; 100 μg Ag85A DNA:(1.24±0.76)％]和DNA電轉染組[10 μg Ag85A DNA:(1.19±1.09)％; 50 μg Ag85A DNA:(2.06±0.96)％;100 μgAg85A DNA:(1.47±0.65)％]均顯著低于生理鹽水電轉染組[(4.14±2.55)％](t值分彆為-3.392、-3.738、-3.616、-3.676、-2.599和-3.325,P值均＜0.05),但不同劑量DNA肌內註射組與DNA電轉染組之間差異無統計學意義(t值分彆為0.284、-1.139和-0.292,P值均＞0.05).結論 DNA電轉染免疫可以增彊低劑量DNA疫苗的免疫應答,使用少量的DNA疫苗就可以產生較好的免疫效果.
목적 연구불동제량결핵병DNA역묘전전염후적면역원성.방법 40지BALB/c소서통과수궤수자표법분위8조,매조5지.기중4조분별용100 μl생리염수화10 μg、50 μg、100 μg결핵분지간균Ag85A DNA기내주사면역소서;령4조용100 μl생리염수화10 μg、50 μg、100 μgAg85ADNA기내주사가전전염면역소서.매2주면역1차,공3차.최후1차면역후2주살사소서.용ELISA방법검측소서비세포배양상청액중γ간우소(IFN-γ)화백세포개소4(interleukin 4,IL-4)수평;용류식세포술검측소서외주혈단개핵세포(PBMC)분비IFN-γ적보조성T세포(helper T cell,Th)1세포백분비、분비IL-4적Th2세포백분비,이급Th1여Th2적세포비치.용SAS 9.2연건처리수거,실험수거이“-x±s”표시,대유관수거진행량인소석인설계적방차분석,량량비교채용t검험,P＜0.05위차이유통계학의의.결과 면역결속후2주,소서비림파세포분비IFN-γ수평,50 μg[(646.05±342.53) pg/ml]화100 μgAg85ADNA기내주사조[(738.61±372.68) pg/ml]현저고우생리염수조[(1.73±3.88)pg/ml](f치분별위4.065、4.647,P치균＜0.05)화10 μg Ag85A DNA조[(87.83±120.82)pg/ml](t치분별위3.513、4.094,P치균＜0.05);10 μg Ag85A DNA전전염조[(357.06±105.18) pg/ml]현저고우생리염수조(t=2.247,P＜0.05),고우100 μg Ag85ADNA전전염조[(86.08±135.73) pg/ml],단차이무통계학의의(t=1.706,P＞0.05);50 μg Ag85ADNA전전염조[(648.60±439.41)pg/ml]현저고우생리염수조(t=4.081,P＜0.05)화100 μg Ag85A DNA전전염조(t=3.539,P＜0.05).여직접기내주사조IFN-γ수평[(87.83±120.82) pg/ml]비교,10 μg Ag85A DNA전전염조증고3배[(357.06 pg/ml)/(87.83 pg/ml)]; 50 μg Ag85A DNA기내주사조[(646.05±342.53) pg/ml]여전전염조[(648.60±439.41)pg/ml]비교,차이무통계학의의(t=-0.016,P＞0.05);100 μg Ag85A DNA전전염조[(86.08±135.73)pg/ml]교기내주사조[(738.61±372.68) pg/ml]강저88.35％(t=4.105,P＜0.05).소서PBMC분비IFN-γ적Th1세포백분비,불동제량Ag85A DNA기내주사조[10 μg Ag85A DNA:(1.39±0.84)％;50 μg Ag85A DNA:(1.55±0.33)％;100 μg Ag85A DNA:(2.13±0.47)％]화DNA전전염조[10 μg Ag85A DNA:(1.42±0.47)％; 50 μg Ag85A DNA:(1.88±0.51)％; 100 μg Ag85ADNA:(1.43±0.68)％]균고우생리염수조[(0.65±0.31)％](t치분별위2.002、2.431、4.015、2.084、3.332화2.105,P치균＜0.05),단불동제량Ag85A DNA전전염조여기내주사조지간차이균무통계학의의(t치분별위0.081、0.901화-1.91,P치균＞0.05).소서PBMC분비IL-4적Th2세포백분비,불동제량Ag85A DNA기내주사조[10 μg Ag85A DNA:(1.42±1.18)％; 50 μg Ag85A DNA:(1.14±0.78)％; 100 μg Ag85A DNA:(1.24±0.76)％]화DNA전전염조[10 μg Ag85A DNA:(1.19±1.09)％; 50 μg Ag85A DNA:(2.06±0.96)％;100 μgAg85A DNA:(1.47±0.65)％]균현저저우생리염수전전염조[(4.14±2.55)％](t치분별위-3.392、-3.738、-3.616、-3.676、-2.599화-3.325,P치균＜0.05),단불동제량DNA기내주사조여DNA전전염조지간차이무통계학의의(t치분별위0.284、-1.139화-0.292,P치균＞0.05).결론 DNA전전염면역가이증강저제량DNA역묘적면역응답,사용소량적DNA역묘취가이산생교호적면역효과.
