中国家禽
中國傢禽
중국가금
CHINA POULTRY
2014年
10期
20-24
,共5页
肠炎沙门菌%SPI-19%hcp基因%克隆%表达
腸炎沙門菌%SPI-19%hcp基因%剋隆%錶達
장염사문균%SPI-19%hcp기인%극륭%표체
利用PCR方法扩增2株肠炎沙门菌参考株CMCC(B)50336和SD-2 SPI-19毒力岛内的hcp基因,将其序列鉴定后克隆入原核表达载体pET-28a(+),构建重组质粒pET28a-hcp,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导重组细菌高效表达;表达产物以包涵体的形式存在,变性条件下用镍亲和柱纯化得到重组蛋白,以每只50 μg剂量免疫小鼠3次,间接ELISA测定抗体效价,用Western blot验证免疫血清的特异性.测序结果显示,2个参考株hcp基因的核苷酸序列与已发表序列的同源性为100％.SDS-PAGE显示20 ku重组蛋白,主要以包涵体形式存在,通过镍亲、层析和尿素变性/复性获得了可溶性的纯化蛋白;免疫小鼠第5周抗体效价达1:8000,且能特异性检测出SPI-19 hcp+肠炎沙门菌和鸡伤寒沙门菌中表达的Hcp蛋白.上述结果表明,制备的外源性重组蛋白具有较好的免疫原性和反应原性,为进一步研究Ⅵ型分泌系统Hcp蛋白在肠炎沙门菌中的功能提供了重要的生物素材.
利用PCR方法擴增2株腸炎沙門菌參攷株CMCC(B)50336和SD-2 SPI-19毒力島內的hcp基因,將其序列鑒定後剋隆入原覈錶達載體pET-28a(+),構建重組質粒pET28a-hcp,併轉化至大腸桿菌BL21(DE3)中,用IPTG誘導重組細菌高效錶達;錶達產物以包涵體的形式存在,變性條件下用鎳親和柱純化得到重組蛋白,以每隻50 μg劑量免疫小鼠3次,間接ELISA測定抗體效價,用Western blot驗證免疫血清的特異性.測序結果顯示,2箇參攷株hcp基因的覈苷痠序列與已髮錶序列的同源性為100％.SDS-PAGE顯示20 ku重組蛋白,主要以包涵體形式存在,通過鎳親、層析和尿素變性/複性穫得瞭可溶性的純化蛋白;免疫小鼠第5週抗體效價達1:8000,且能特異性檢測齣SPI-19 hcp+腸炎沙門菌和鷄傷寒沙門菌中錶達的Hcp蛋白.上述結果錶明,製備的外源性重組蛋白具有較好的免疫原性和反應原性,為進一步研究Ⅵ型分泌繫統Hcp蛋白在腸炎沙門菌中的功能提供瞭重要的生物素材.
이용PCR방법확증2주장염사문균삼고주CMCC(B)50336화SD-2 SPI-19독력도내적hcp기인,장기서렬감정후극륭입원핵표체재체pET-28a(+),구건중조질립pET28a-hcp,병전화지대장간균BL21(DE3)중,용IPTG유도중조세균고효표체;표체산물이포함체적형식존재,변성조건하용얼친화주순화득도중조단백,이매지50 μg제량면역소서3차,간접ELISA측정항체효개,용Western blot험증면역혈청적특이성.측서결과현시,2개삼고주hcp기인적핵감산서렬여이발표서렬적동원성위100％.SDS-PAGE현시20 ku중조단백,주요이포함체형식존재,통과얼친、층석화뇨소변성/복성획득료가용성적순화단백;면역소서제5주항체효개체1:8000,차능특이성검측출SPI-19 hcp+장염사문균화계상한사문균중표체적Hcp단백.상술결과표명,제비적외원성중조단백구유교호적면역원성화반응원성,위진일보연구Ⅵ형분비계통Hcp단백재장염사문균중적공능제공료중요적생물소재.
