食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2014年
9期
192-197
,共6页
朱运明%王晓飞%闵伟红%詹冬玲%王隆洋
硃運明%王曉飛%閔偉紅%詹鼕玲%王隆洋
주운명%왕효비%민위홍%첨동령%왕륭양
北京棒杆菌%天冬氨酸激酶%定点突变%酶学性质
北京棒桿菌%天鼕氨痠激酶%定點突變%酶學性質
북경봉간균%천동안산격매%정점돌변%매학성질
Corynebacterium pekinense E31%aspartate kinase%site-directed mutagenesis%enzymatic activity
采用饱和定点突变和高通量筛选技术,对北京棒杆菌天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK) AK Gly377位点进行突变,并筛选获得高活力突变体G377F,分离纯化后对G377F AK酶学性质进行表征.结果表明:突变体AK最适pH值为9.0,较突变前野生型(wide type,WT)最适pH值为8.5有所提高;最适反应温度与WT一致,均为25℃;半衰期由WT的2.6h提高到5.3h;pH耐受性在5h内保持其活力50％以上,与WT3h内酶活力保持能力相同.G377F对金属离子和有机溶剂均表现出良好的抗性.其中,Lys的抑制作用在一定程度上被解除,当Lys和Met同时存在时对AK具有明显的激活作用.动力学研究显示:G377F AK Vmax较WT提高9.3倍;n值为1.0明显低于WT的2.7,说明AK正协同性降低,趋向于米氏酶.
採用飽和定點突變和高通量篩選技術,對北京棒桿菌天鼕氨痠激酶(aspartate kinase,AK) AK Gly377位點進行突變,併篩選穫得高活力突變體G377F,分離純化後對G377F AK酶學性質進行錶徵.結果錶明:突變體AK最適pH值為9.0,較突變前野生型(wide type,WT)最適pH值為8.5有所提高;最適反應溫度與WT一緻,均為25℃;半衰期由WT的2.6h提高到5.3h;pH耐受性在5h內保持其活力50％以上,與WT3h內酶活力保持能力相同.G377F對金屬離子和有機溶劑均錶現齣良好的抗性.其中,Lys的抑製作用在一定程度上被解除,噹Lys和Met同時存在時對AK具有明顯的激活作用.動力學研究顯示:G377F AK Vmax較WT提高9.3倍;n值為1.0明顯低于WT的2.7,說明AK正協同性降低,趨嚮于米氏酶.
채용포화정점돌변화고통량사선기술,대북경봉간균천동안산격매(aspartate kinase,AK) AK Gly377위점진행돌변,병사선획득고활력돌변체G377F,분리순화후대G377F AK매학성질진행표정.결과표명:돌변체AK최괄pH치위9.0,교돌변전야생형(wide type,WT)최괄pH치위8.5유소제고;최괄반응온도여WT일치,균위25℃;반쇠기유WT적2.6h제고도5.3h;pH내수성재5h내보지기활력50％이상,여WT3h내매활력보지능력상동.G377F대금속리자화유궤용제균표현출량호적항성.기중,Lys적억제작용재일정정도상피해제,당Lys화Met동시존재시대AK구유명현적격활작용.동역학연구현시:G377F AK Vmax교WT제고9.3배;n치위1.0명현저우WT적2.7,설명AK정협동성강저,추향우미씨매.
