中国老年学杂志
中國老年學雜誌
중국노년학잡지
CHINESE JOURNAL OF GERONTOLOGY
2014年
11期
3058-3060
,共3页
肝纤维化%肝星状细胞%Raf激酶抑制蛋白%细胞外基质%黏附
肝纖維化%肝星狀細胞%Raf激酶抑製蛋白%細胞外基質%黏附
간섬유화%간성상세포%Raf격매억제단백%세포외기질%점부
Hepatic fibrosis%Hepatic stellate cells%Raf kinase inhibitor protein%Extracellular matrix%Adhesion
目的：研究RKIP低表达对肝星状细胞（ HSC）在细胞外基质上黏附功能的影响。方法通过 RKIP的 RNAi腺病毒载体感染 HSC细胞株LX-2，实验分为RKIP的RNAi组（RKIP-RNAi-AD）和阴性对照组（NC-RNAi-GFP-AD）。 Western 印迹方法确定病毒感染后验证外源 RKIP在细胞内表达情况。采用matrigel、Ⅰ型胶原及纤维连接蛋白包被的24孔板模拟肝纤维化病理状态下 ECM成分的改变，将腺病毒干预后的 LX-2以1.0×105/ml的浓度接种到包被后24孔板上，37℃培养1 h后，甲醛固定，结晶紫染色。200倍纤维镜下观察并计数黏附的细胞数。结果 RKIP的RNAi组较对照组蛋白表达减少（0.29±0.06 vs 0.73±0.14，P＜0.05）。与 NC-RNAi-GFP-AD对照组相比，RKIP在HSC 的低表达促进细胞在 matrigel上的黏附（170±25 vs 66±12，P＜0.05）。与NC-RNAi-GFP-AD对照组相比，RKIP在HSC 的低表达促进细胞在I型胶原上的黏附（200±25 vs 82±13， P＜0.05）。与NC-RNAi-GFP-AD对照组相比，RKIP在HSC的低表达促进细胞在纤维连接蛋白上的黏附（276±28 vs 96±17，P＜0.05）。结论 SiRNA靶向RKIP可以促进HSC在胶原基质上的粘附。
目的：研究RKIP低錶達對肝星狀細胞（ HSC）在細胞外基質上黏附功能的影響。方法通過 RKIP的 RNAi腺病毒載體感染 HSC細胞株LX-2，實驗分為RKIP的RNAi組（RKIP-RNAi-AD）和陰性對照組（NC-RNAi-GFP-AD）。 Western 印跡方法確定病毒感染後驗證外源 RKIP在細胞內錶達情況。採用matrigel、Ⅰ型膠原及纖維連接蛋白包被的24孔闆模擬肝纖維化病理狀態下 ECM成分的改變，將腺病毒榦預後的 LX-2以1.0×105/ml的濃度接種到包被後24孔闆上，37℃培養1 h後，甲醛固定，結晶紫染色。200倍纖維鏡下觀察併計數黏附的細胞數。結果 RKIP的RNAi組較對照組蛋白錶達減少（0.29±0.06 vs 0.73±0.14，P＜0.05）。與 NC-RNAi-GFP-AD對照組相比，RKIP在HSC 的低錶達促進細胞在 matrigel上的黏附（170±25 vs 66±12，P＜0.05）。與NC-RNAi-GFP-AD對照組相比，RKIP在HSC 的低錶達促進細胞在I型膠原上的黏附（200±25 vs 82±13， P＜0.05）。與NC-RNAi-GFP-AD對照組相比，RKIP在HSC的低錶達促進細胞在纖維連接蛋白上的黏附（276±28 vs 96±17，P＜0.05）。結論 SiRNA靶嚮RKIP可以促進HSC在膠原基質上的粘附。
목적：연구RKIP저표체대간성상세포（ HSC）재세포외기질상점부공능적영향。방법통과 RKIP적 RNAi선병독재체감염 HSC세포주LX-2，실험분위RKIP적RNAi조（RKIP-RNAi-AD）화음성대조조（NC-RNAi-GFP-AD）。 Western 인적방법학정병독감염후험증외원 RKIP재세포내표체정황。채용matrigel、Ⅰ형효원급섬유련접단백포피적24공판모의간섬유화병리상태하 ECM성분적개변，장선병독간예후적 LX-2이1.0×105/ml적농도접충도포피후24공판상，37℃배양1 h후，갑철고정，결정자염색。200배섬유경하관찰병계수점부적세포수。결과 RKIP적RNAi조교대조조단백표체감소（0.29±0.06 vs 0.73±0.14，P＜0.05）。여 NC-RNAi-GFP-AD대조조상비，RKIP재HSC 적저표체촉진세포재 matrigel상적점부（170±25 vs 66±12，P＜0.05）。여NC-RNAi-GFP-AD대조조상비，RKIP재HSC 적저표체촉진세포재I형효원상적점부（200±25 vs 82±13， P＜0.05）。여NC-RNAi-GFP-AD대조조상비，RKIP재HSC적저표체촉진세포재섬유련접단백상적점부（276±28 vs 96±17，P＜0.05）。결론 SiRNA파향RKIP가이촉진HSC재효원기질상적점부。
Objective To investigated hepatic stellate cell-matrix adhesion with siRNA targeting RKIP .Methods Hepatic stellate cells (HSC), LX-2 cell line, were cultured and infected with siRNA targeting adenovirus vector (RKIP-RNAi-AD) or the control adenovirus vector ( NC-RNAi-GFP-AD) .RKIP protein expressions were investigated by Western blot .Infected cells were prepared into a density of 1 × 105 cells/ml, plated into dishes cultured with matrigel , type I collagen, and fibronectin.LX-2 cells were cultured for 1 h under humidified atmosphere of 5%CO2 and 95% air at 37℃.The cells were fixed in 4% paraformaldehyde solution and stained with crystal violet .Cell number for each field was viewed under light microscopy and the positive labeling cells were counted .Results In RKIP-RNAi-AD group, RKIP expression was lower than that of control group (0.29±0.06 vs 0.73±0.14, P<0.05).SiRNA targeting RKIP increased the cell num-ber of HSC adhesion in matrigel than the control group (170±25 vs 66±12,P<0.05).RKIP overexpresssion also reduced the cell number of HSC adhesion in type I collagen than the control group (200±25 vs 82±13, P<0.05), and in fibronectin (276±28 vs 96±17, P<0.05). Conclusions SiRNA targeting RKIP promotes hepatic stellate cell adhesion in extracellular matrix .
