生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2013年
3期
378-381
,共4页
齐玉凯%孙钰%刘丽英%李显耀
齊玉凱%孫鈺%劉麗英%李顯耀
제옥개%손옥%류려영%리현요
EDTA-Na2%抗凝剂%血液指标%基因组DNA%PCR扩增
EDTA-Na2%抗凝劑%血液指標%基因組DNA%PCR擴增
EDTA-Na2%항응제%혈액지표%기인조DNA%PCR확증
EDTA-Na2%anticoagulant%blood index%genome DNA%PCR amplification
目的：分析不同浓度的抗凝剂EDTA-Na2对家禽血液指标及基因组DNA抽提的影响。方法：采集鸡血，分别加入0.6（A组）、0.9（B组）、1.2（C组）、1.5（D组）、1.8（E组）和2.1（F组） mg/mL的EDTA-Na2，立即检测白细胞总数（WBC）、淋巴细胞（LYM）、中间细胞（MID）、粒细胞（GRAN）、红细胞总数（RBC）、血红蛋白（HGB）、血红蛋白含量（MCH）和血小板总数（PLT），用SPSS软件分析检测数据；用酚-氯仿法提取添加不同量抗凝剂的血液基因组DNA，并进行PCR扩增，基因组DNA和PCR产物用琼脂糖凝胶电泳检测。结果：A组样品出现肉眼可见的凝块，B组有2/7样品有凝集现象，C、D、E和F组均无凝集现象。A组凝集现象严重无法进行血液指标测定，其余5组样品中，对于RBC和HGB指标，C组与B组相比无显著性差异，与D、E、F组差异极显著（P<0.01）；对于PLT，C组与B组相比无显著性差异，与D、E、F组差异显著（P<0.05）；WBC无显著变化。除A组外，各组均能获得质量较好的基因组DNA，并能扩增出目的条带。结论：除A组外，不同浓度的EDTA-Na2对基因组DNA提取和PCR扩增无影响。以EDTA-Na2作为禽血抗凝剂时，建议用量应不低于1.2 mg/mL。
目的：分析不同濃度的抗凝劑EDTA-Na2對傢禽血液指標及基因組DNA抽提的影響。方法：採集鷄血，分彆加入0.6（A組）、0.9（B組）、1.2（C組）、1.5（D組）、1.8（E組）和2.1（F組） mg/mL的EDTA-Na2，立即檢測白細胞總數（WBC）、淋巴細胞（LYM）、中間細胞（MID）、粒細胞（GRAN）、紅細胞總數（RBC）、血紅蛋白（HGB）、血紅蛋白含量（MCH）和血小闆總數（PLT），用SPSS軟件分析檢測數據；用酚-氯倣法提取添加不同量抗凝劑的血液基因組DNA，併進行PCR擴增，基因組DNA和PCR產物用瓊脂糖凝膠電泳檢測。結果：A組樣品齣現肉眼可見的凝塊，B組有2/7樣品有凝集現象，C、D、E和F組均無凝集現象。A組凝集現象嚴重無法進行血液指標測定，其餘5組樣品中，對于RBC和HGB指標，C組與B組相比無顯著性差異，與D、E、F組差異極顯著（P<0.01）；對于PLT，C組與B組相比無顯著性差異，與D、E、F組差異顯著（P<0.05）；WBC無顯著變化。除A組外，各組均能穫得質量較好的基因組DNA，併能擴增齣目的條帶。結論：除A組外，不同濃度的EDTA-Na2對基因組DNA提取和PCR擴增無影響。以EDTA-Na2作為禽血抗凝劑時，建議用量應不低于1.2 mg/mL。
목적：분석불동농도적항응제EDTA-Na2대가금혈액지표급기인조DNA추제적영향。방법：채집계혈，분별가입0.6（A조）、0.9（B조）、1.2（C조）、1.5（D조）、1.8（E조）화2.1（F조） mg/mL적EDTA-Na2，립즉검측백세포총수（WBC）、림파세포（LYM）、중간세포（MID）、립세포（GRAN）、홍세포총수（RBC）、혈홍단백（HGB）、혈홍단백함량（MCH）화혈소판총수（PLT），용SPSS연건분석검측수거；용분-록방법제취첨가불동량항응제적혈액기인조DNA，병진행PCR확증，기인조DNA화PCR산물용경지당응효전영검측。결과：A조양품출현육안가견적응괴，B조유2/7양품유응집현상，C、D、E화F조균무응집현상。A조응집현상엄중무법진행혈액지표측정，기여5조양품중，대우RBC화HGB지표，C조여B조상비무현저성차이，여D、E、F조차이겁현저（P<0.01）；대우PLT，C조여B조상비무현저성차이，여D、E、F조차이현저（P<0.05）；WBC무현저변화。제A조외，각조균능획득질량교호적기인조DNA，병능확증출목적조대。결론：제A조외，불동농도적EDTA-Na2대기인조DNA제취화PCR확증무영향。이EDTA-Na2작위금혈항응제시，건의용량응불저우1.2 mg/mL。
Objective: To analyze the effect of different concentrations of EDTA-Na2 on the poultry blood indexes and genomic DNA extraction. Methods: One milliliter blood were collected from chicken wing vein, 0.6(A), 0.9 (B), 1.2(C), 1.5(D), 1.8(E) and 2.1(F) mg/mL EDTA-Na2 anticoagulants were added to each group, respective?ly. Each group consisted of 7 samples. WBC, LYM, MID, GRAN, RBC, HGB, MCH and PLT were measured for each sample. The data were analyzed using SPSS. Genomic DNA was extracted with phenol-chloroform method from each sample and used for PCR to amplify β-actin. DNA and PCR products were analyzed by agarose gel electrophoresis. Results: All samples in group A appear clots, 2/7 of group B samples appear clots, and the re?maining four groups did not appear clots. We couldn't test blood indexes of group A because of agglutinate phe?nomenon. The RBC and HGB did not differ between group C and group B, but there were significant differences (P<0.01) when compared with group D, E, F. The PLT had the same trend(P<0.05) as the RBC and HGB. There were no significant differences among all groups for WBC. Genomic DNA was good enough to used for PCR amplification except for group A. Conclusion: Different concentrations EDTA-Na2 have no significant effect on genomic DNA quality and PCR amplification except group A. The suggested dosage should be not less than 1.2 mg/mL when using EDTA-Na2 as anticoagulant in poultry.
