首都医科大学学报
首都醫科大學學報
수도의과대학학보
JOURNAL OF CAPITAL UNIVERSITY OF MEDICAL SCIENCES
2012年
5期
629-633
,共5页
王鹏%许洁%李昕%何欣%李尧华%于顺
王鵬%許潔%李昕%何訢%李堯華%于順
왕붕%허길%리흔%하흔%리요화%우순
突触核蛋白%原代神经元培养%突起生长%帕金森病
突觸覈蛋白%原代神經元培養%突起生長%帕金森病
돌촉핵단백%원대신경원배양%돌기생장%파금삼병
目的 观察人α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)和其突变体A30P和A53T对大鼠原代培养神经元突起生长的影响,明确α-Syn的生理功能,揭示突变体A30P和A53T在帕金森病的发病机制中的作用.方法 取大鼠大脑皮质神经元分组培养,在细胞外添加A30P、A53T和α-Syn,培养1h、2h和4h后固定,比较A30P、A53T与α-Syn对神经元突起生长的影响.神经元突起以成像显微镜观察测量,Western blotting法、免疫荧光法、单克隆抗体阻断实验鉴定各蛋白作用的特异性.结果 添加α-Syn组的神经元培养至1、2和4h时,其突起的平均长度大于对照组和添加A30P、A53T组(P＜0.05).A30P、A53T组和对照组的神经元突起长度差异无统计学意义(P＞0.05).增加蛋白的含量,浓度越高,α-Syn组神经元突起的平均长度与添加A30P和A53T组差异越大(P＜0.01).Western blotting和免疫荧光实验明确了外源性α-Syn可以从培养基进入到神经元内,并均匀分布在胞体和突起.而A30P和A53T组,并未发现.结论 α-Syn在原代神经元生长初期对其突起生长具有促进作用,突变体A30P和A53T,无促神经元突起生长作用,这一现象可能与其在帕金森病发病机制中的作用有关.
目的 觀察人α-突觸覈蛋白(α-synuclein,α-Syn)和其突變體A30P和A53T對大鼠原代培養神經元突起生長的影響,明確α-Syn的生理功能,揭示突變體A30P和A53T在帕金森病的髮病機製中的作用.方法 取大鼠大腦皮質神經元分組培養,在細胞外添加A30P、A53T和α-Syn,培養1h、2h和4h後固定,比較A30P、A53T與α-Syn對神經元突起生長的影響.神經元突起以成像顯微鏡觀察測量,Western blotting法、免疫熒光法、單剋隆抗體阻斷實驗鑒定各蛋白作用的特異性.結果 添加α-Syn組的神經元培養至1、2和4h時,其突起的平均長度大于對照組和添加A30P、A53T組(P＜0.05).A30P、A53T組和對照組的神經元突起長度差異無統計學意義(P＞0.05).增加蛋白的含量,濃度越高,α-Syn組神經元突起的平均長度與添加A30P和A53T組差異越大(P＜0.01).Western blotting和免疫熒光實驗明確瞭外源性α-Syn可以從培養基進入到神經元內,併均勻分佈在胞體和突起.而A30P和A53T組,併未髮現.結論 α-Syn在原代神經元生長初期對其突起生長具有促進作用,突變體A30P和A53T,無促神經元突起生長作用,這一現象可能與其在帕金森病髮病機製中的作用有關.
목적 관찰인α-돌촉핵단백(α-synuclein,α-Syn)화기돌변체A30P화A53T대대서원대배양신경원돌기생장적영향,명학α-Syn적생리공능,게시돌변체A30P화A53T재파금삼병적발병궤제중적작용.방법 취대서대뇌피질신경원분조배양,재세포외첨가A30P、A53T화α-Syn,배양1h、2h화4h후고정,비교A30P、A53T여α-Syn대신경원돌기생장적영향.신경원돌기이성상현미경관찰측량,Western blotting법、면역형광법、단극륭항체조단실험감정각단백작용적특이성.결과 첨가α-Syn조적신경원배양지1、2화4h시,기돌기적평균장도대우대조조화첨가A30P、A53T조(P＜0.05).A30P、A53T조화대조조적신경원돌기장도차이무통계학의의(P＞0.05).증가단백적함량,농도월고,α-Syn조신경원돌기적평균장도여첨가A30P화A53T조차이월대(P＜0.01).Western blotting화면역형광실험명학료외원성α-Syn가이종배양기진입도신경원내,병균균분포재포체화돌기.이A30P화A53T조,병미발현.결론 α-Syn재원대신경원생장초기대기돌기생장구유촉진작용,돌변체A30P화A53T,무촉신경원돌기생장작용,저일현상가능여기재파금삼병발병궤제중적작용유관.
