首都医科大学学报
首都醫科大學學報
수도의과대학학보
JOURNAL OF CAPITAL UNIVERSITY OF MEDICAL SCIENCES
2012年
5期
557-564
,共8页
张轶博%曾瑞霞%牛静%郑少鹏%贾弘褆%丁卫
張軼博%曾瑞霞%牛靜%鄭少鵬%賈弘褆%丁衛
장질박%증서하%우정%정소붕%가홍제%정위
可致肿瘤细胞死亡的人α乳清蛋白%α乳清蛋白%肿瘤细胞%程序性死亡
可緻腫瘤細胞死亡的人α乳清蛋白%α乳清蛋白%腫瘤細胞%程序性死亡
가치종류세포사망적인α유청단백%α유청단백%종류세포%정서성사망
目的 可致肿瘤细胞死亡的人α乳清蛋白(human alpha-lactalbumin made lethal to tumor cells,HAMLET)是一种可导致多种癌细胞死亡的强效选择性肿瘤杀伤蛋白质-脂酸复合物.为了使HAMLET应用于肿瘤的治疗并对其杀伤机制进行探讨,我们需要建立和优化简便、快速、规模化制备与纯化HAMLET的方法.方法 通过构建人α乳清蛋白分泌型细胞MCF-7的cDNA文库,PCR扩增出编码人α乳清蛋白成熟肽段的全长序列,然后克隆人pET30a(+)表达载体质粒,并转化BL21(DE3)宿主大肠杆菌.经过IPTG诱导,表达细菌的裂解,蛋白体外复性,Ni-NTA亲和层析柱纯化等步骤,获得了高纯度的重组人α乳清蛋白的C端His标签融合蛋白.纯化蛋白经EDTA脱钙后,与油酸(oleic acid,OA)在加热条件下制备HAMLET复合物.同时,对HAMLET的理化特性和生物学活性进行检测.结果 通过与经典方法制备的牛α乳清蛋白和OA复合物(BAMLET)进行比较,发现我们制备的HAMLET在紫外吸收光谱、疏水性质特征及肿瘤杀伤活力方面与BAMLET活性相符,并且可引起HeLa肿瘤细胞的凋亡样程序性死亡.结论 本研究自主制备的HAMLET成本经济、方法简便且具有较好的规模化放大前景,为日后临床应用奠定基础.
目的 可緻腫瘤細胞死亡的人α乳清蛋白(human alpha-lactalbumin made lethal to tumor cells,HAMLET)是一種可導緻多種癌細胞死亡的彊效選擇性腫瘤殺傷蛋白質-脂痠複閤物.為瞭使HAMLET應用于腫瘤的治療併對其殺傷機製進行探討,我們需要建立和優化簡便、快速、規模化製備與純化HAMLET的方法.方法 通過構建人α乳清蛋白分泌型細胞MCF-7的cDNA文庫,PCR擴增齣編碼人α乳清蛋白成熟肽段的全長序列,然後剋隆人pET30a(+)錶達載體質粒,併轉化BL21(DE3)宿主大腸桿菌.經過IPTG誘導,錶達細菌的裂解,蛋白體外複性,Ni-NTA親和層析柱純化等步驟,穫得瞭高純度的重組人α乳清蛋白的C耑His標籤融閤蛋白.純化蛋白經EDTA脫鈣後,與油痠(oleic acid,OA)在加熱條件下製備HAMLET複閤物.同時,對HAMLET的理化特性和生物學活性進行檢測.結果 通過與經典方法製備的牛α乳清蛋白和OA複閤物(BAMLET)進行比較,髮現我們製備的HAMLET在紫外吸收光譜、疏水性質特徵及腫瘤殺傷活力方麵與BAMLET活性相符,併且可引起HeLa腫瘤細胞的凋亡樣程序性死亡.結論 本研究自主製備的HAMLET成本經濟、方法簡便且具有較好的規模化放大前景,為日後臨床應用奠定基礎.
목적 가치종류세포사망적인α유청단백(human alpha-lactalbumin made lethal to tumor cells,HAMLET)시일충가도치다충암세포사망적강효선택성종류살상단백질-지산복합물.위료사HAMLET응용우종류적치료병대기살상궤제진행탐토,아문수요건립화우화간편、쾌속、규모화제비여순화HAMLET적방법.방법 통과구건인α유청단백분비형세포MCF-7적cDNA문고,PCR확증출편마인α유청단백성숙태단적전장서렬,연후극륭인pET30a(+)표체재체질립,병전화BL21(DE3)숙주대장간균.경과IPTG유도,표체세균적렬해,단백체외복성,Ni-NTA친화층석주순화등보취,획득료고순도적중조인α유청단백적C단His표첨융합단백.순화단백경EDTA탈개후,여유산(oleic acid,OA)재가열조건하제비HAMLET복합물.동시,대HAMLET적이화특성화생물학활성진행검측.결과 통과여경전방법제비적우α유청단백화OA복합물(BAMLET)진행비교,발현아문제비적HAMLET재자외흡수광보、소수성질특정급종류살상활력방면여BAMLET활성상부,병차가인기HeLa종류세포적조망양정서성사망.결론 본연구자주제비적HAMLET성본경제、방법간편차구유교호적규모화방대전경,위일후림상응용전정기출.
