食品与生物技术学报
食品與生物技術學報
식품여생물기술학보
JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY
2012年
9期
973-977
,共5页
朱龙宝%汤斌%陶玉贵%葛飞%魏胜华%陈涛%李婉珍
硃龍寶%湯斌%陶玉貴%葛飛%魏勝華%陳濤%李婉珍
주룡보%탕빈%도옥귀%갈비%위성화%진도%리완진
黑曲霉%β-葡萄糖苷酶%毕赤酵母%基因克隆%分泌表达
黑麯黴%β-葡萄糖苷酶%畢赤酵母%基因剋隆%分泌錶達
흑곡매%β-포도당감매%필적효모%기인극륭%분비표체
为大规模制备β-葡萄糖苷酶,构建重组酵母工程菌,实现β-葡萄糖苷酶的分泌表达.根据已报道黑曲霉(A spergillus niger)β-葡萄糖苷酶cDNA序列设计一对引物,采用RT-PCR扩增,获得黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因(bgl).构建了pMD-18T-bgl克隆载体,bgl亚克隆到质粒pPIC9K,构建表达载体pPIC9K-bgl.经BglⅡ线性化后电转入Pichia pastoris GS115,经过MD、YPD/G418平板筛选阳性克隆,获得分泌表达重组P.pastoris GS115的工程菌.用终体积分数1％的甲醇对其进行诱导表达,SDS-PAGE和酶活测定结果表明,重组毕赤酵母分泌了1个相对分子质量约90000的蛋白质,与该酶基因产物的理论值一致.酶催化的最适温度为50℃,最适pH 5.5,其酶活达到38 U/mL,比已报导重组酶产酶水平有较大程度的提高.
為大規模製備β-葡萄糖苷酶,構建重組酵母工程菌,實現β-葡萄糖苷酶的分泌錶達.根據已報道黑麯黴(A spergillus niger)β-葡萄糖苷酶cDNA序列設計一對引物,採用RT-PCR擴增,穫得黑麯黴β-葡萄糖苷酶基因(bgl).構建瞭pMD-18T-bgl剋隆載體,bgl亞剋隆到質粒pPIC9K,構建錶達載體pPIC9K-bgl.經BglⅡ線性化後電轉入Pichia pastoris GS115,經過MD、YPD/G418平闆篩選暘性剋隆,穫得分泌錶達重組P.pastoris GS115的工程菌.用終體積分數1％的甲醇對其進行誘導錶達,SDS-PAGE和酶活測定結果錶明,重組畢赤酵母分泌瞭1箇相對分子質量約90000的蛋白質,與該酶基因產物的理論值一緻.酶催化的最適溫度為50℃,最適pH 5.5,其酶活達到38 U/mL,比已報導重組酶產酶水平有較大程度的提高.
위대규모제비β-포도당감매,구건중조효모공정균,실현β-포도당감매적분비표체.근거이보도흑곡매(A spergillus niger)β-포도당감매cDNA서렬설계일대인물,채용RT-PCR확증,획득흑곡매β-포도당감매기인(bgl).구건료pMD-18T-bgl극륭재체,bgl아극륭도질립pPIC9K,구건표체재체pPIC9K-bgl.경BglⅡ선성화후전전입Pichia pastoris GS115,경과MD、YPD/G418평판사선양성극륭,획득분비표체중조P.pastoris GS115적공정균.용종체적분수1％적갑순대기진행유도표체,SDS-PAGE화매활측정결과표명,중조필적효모분비료1개상대분자질량약90000적단백질,여해매기인산물적이론치일치.매최화적최괄온도위50℃,최괄pH 5.5,기매활체도38 U/mL,비이보도중조매산매수평유교대정도적제고.
