现代肿瘤医学
現代腫瘤醫學
현대종류의학
JOURNAL OF MODERN ONCOLOGY
2012年
10期
2012-2016
,共5页
任敬远%赵晓东%朱丹%陈伟刚%郑周红%刘鸣%田霖丽%孙亚男
任敬遠%趙曉東%硃丹%陳偉剛%鄭週紅%劉鳴%田霖麗%孫亞男
임경원%조효동%주단%진위강%정주홍%류명%전림려%손아남
miR-21%慢病毒%喉鳞癌%反义寡核苷酸%增殖
miR-21%慢病毒%喉鱗癌%反義寡覈苷痠%增殖
miR-21%만병독%후린암%반의과핵감산%증식
目的:克隆反义微小RNA hsa-miR-21并构建其慢病毒表达载体,观察反义寡核苷酸重组慢病毒(ASO-miR-21)对喉癌细胞增殖的调控作用.方法:针对hsa-miR-21核苷酸序列,设计并合成mir-21反义寡核苷酸,将pGCSIL-GFP Vector经双酶切后连接产生pGCSIL-GFP-miR-21慢病毒表达载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.pGC-LV-miR-21、pHelper 1.0和pHelper 2.0质粒共转染细胞293T,包装慢病毒.以293T细胞绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达水平测定病毒滴度.采用MTT法及克隆形成实验检测反义miR-21(ASO-miR-21)重组慢病毒对喉癌细胞增殖能力的影响.结果:成功构建反义hsa-miR-21的慢病毒表达载体,采用ASO-miR-21抑制喉癌细胞内高水平表达miR-21的活性后,可显著抑制喉癌细胞增殖.结论:成功构建反义miR-21的慢病毒表达载体,ASO-miR-21可以明显抑制喉癌细胞增殖.
目的:剋隆反義微小RNA hsa-miR-21併構建其慢病毒錶達載體,觀察反義寡覈苷痠重組慢病毒(ASO-miR-21)對喉癌細胞增殖的調控作用.方法:針對hsa-miR-21覈苷痠序列,設計併閤成mir-21反義寡覈苷痠,將pGCSIL-GFP Vector經雙酶切後連接產生pGCSIL-GFP-miR-21慢病毒錶達載體,PCR篩選暘性剋隆,測序鑒定.pGC-LV-miR-21、pHelper 1.0和pHelper 2.0質粒共轉染細胞293T,包裝慢病毒.以293T細胞綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的錶達水平測定病毒滴度.採用MTT法及剋隆形成實驗檢測反義miR-21(ASO-miR-21)重組慢病毒對喉癌細胞增殖能力的影響.結果:成功構建反義hsa-miR-21的慢病毒錶達載體,採用ASO-miR-21抑製喉癌細胞內高水平錶達miR-21的活性後,可顯著抑製喉癌細胞增殖.結論:成功構建反義miR-21的慢病毒錶達載體,ASO-miR-21可以明顯抑製喉癌細胞增殖.
목적:극륭반의미소RNA hsa-miR-21병구건기만병독표체재체,관찰반의과핵감산중조만병독(ASO-miR-21)대후암세포증식적조공작용.방법:침대hsa-miR-21핵감산서렬,설계병합성mir-21반의과핵감산,장pGCSIL-GFP Vector경쌍매절후련접산생pGCSIL-GFP-miR-21만병독표체재체,PCR사선양성극륭,측서감정.pGC-LV-miR-21、pHelper 1.0화pHelper 2.0질립공전염세포293T,포장만병독.이293T세포록색형광단백(green fluorescent protein,GFP)적표체수평측정병독적도.채용MTT법급극륭형성실험검측반의miR-21(ASO-miR-21)중조만병독대후암세포증식능력적영향.결과:성공구건반의hsa-miR-21적만병독표체재체,채용ASO-miR-21억제후암세포내고수평표체miR-21적활성후,가현저억제후암세포증식.결론:성공구건반의miR-21적만병독표체재체,ASO-miR-21가이명현억제후암세포증식.
