CAJ | 학술논문

利用荧光素酶(Luciferase)报告基因检测技术,构建稳定表达人雌激素受体α(hERα)或人雌激素受体β(hERβ)的重组HeLa细胞株(该细胞株无内源性激素受体).通过培养已转入并能成功表达的包含雌激素反应元件ERE的报告质粒pERE-Luc的HeLa细胞,用17β-雌二醇(E2)、己烯雌酚、孕酮处理后检测荧光素酶的表达活性.Luc的荧光表达倍率与E2、己烯雌酚、孕酮标样浓度呈非线性关系,相关系数分别达到0.8798、0.9550和0.9262.1.0×10-13 mol/L时E2可出现明显的兴奋效应,至1.0 × 10-9 mol/L可达到最大反应值,而未转染雌激素受体质粒与E2无明显反应.同时己烯雌酚和孕酮均可以表现雌激素样活性,浓度大于1.0×10-10 mol/L,己烯雌酚表现雌激素样活性；浓度大于1.0×10-11 mol/L,孕酮表现雌激素样活性,表明孕酮的雌激素样活性高于己烯雌酚.使用浓度均为1.0×10-10 mol/L的E2、己烯雌酚、孕酮分别处理,报告基因的发光均值分别为0.9474、0.3123和0.5796,相对标准偏差(RSD)分别为13.7％、3.7％和3.4％,证明上述3种物质对于荧光素酶报告基因表达活性的影响具有很好的重复性.运用同样原理检测草鱼、带鱼、鲫鱼和鲷鱼鱼肉中雌激素样物质的含量,E2的加标回收率均在75％以上,RSD为7.3％～11.6％,精密度较好.该研究基于荧光素酶报告基因的体外雌激素样物质检测方法有效可靠.
이용형광소매(Luciferase)보고기인검측기술,구건은정표체인자격소수체α(hERα)혹인자격소수체β(hERβ)적중조HeLa세포주(해세포주무내원성격소수체).통과배양이전입병능성공표체적포함자격소반응원건ERE적보고질립pERE-Luc적HeLa세포,용17β-자이순(E2)、기희자분、잉동처리후검측형광소매적표체활성.Luc적형광표체배솔여E2、기희자분、잉동표양농도정비선성관계,상관계수분별체도0.8798、0.9550화0.9262.1.0×10-13 mol/L시E2가출현명현적흥강효응,지1.0 × 10-9 mol/L가체도최대반응치,이미전염자격소수체질립여E2무명현반응.동시기희자분화잉동균가이표현자격소양활성,농도대우1.0×10-10 mol/L,기희자분표현자격소양활성；농도대우1.0×10-11 mol/L,잉동표현자격소양활성,표명잉동적자격소양활성고우기희자분.사용농도균위1.0×10-10 mol/L적E2、기희자분、잉동분별처리,보고기인적발광균치분별위0.9474、0.3123화0.5796,상대표준편차(RSD)분별위13.7％、3.7％화3.4％,증명상술3충물질대우형광소매보고기인표체활성적영향구유흔호적중복성.운용동양원리검측초어、대어、즉어화조어어육중자격소양물질적함량,E2적가표회수솔균재75％이상,RSD위7.3％～11.6％,정밀도교호.해연구기우형광소매보고기인적체외자격소양물질검측방법유효가고.