同济大学学报（医学版）
同濟大學學報（醫學版）
동제대학학보（의학판）
JOURNAL OF TONGJI UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCE)
2012年
5期
22-27,32
,共7页
罗金刚%罗晓红%肖颂华%王英%许英%段朝晖
囉金剛%囉曉紅%肖頌華%王英%許英%段朝暉
라금강%라효홍%초송화%왕영%허영%단조휘
阿尔茨海默病%转基因小鼠%基因分型%双重PCR%杂合子
阿爾茨海默病%轉基因小鼠%基因分型%雙重PCR%雜閤子
아이자해묵병%전기인소서%기인분형%쌍중PCR%잡합자
目的 探讨老年性痴呆( Alzheimer disease,AD)转基因模型鼠Tg(APPswe PSEN1 dE9)85Dbo的优化繁育和基因分型方法,筛选出适合AD研究的稳定转基因动物.方法 3种不同的繁殖配伍分组(组1,+/+♂×-/-♀;组2,+/+♀×-/-♂;组3,+/+♀×+/+♂)研究子代鼠的存活率及PS1转基因阳性率;提取子二代鼠尾基因组DNA并鉴定其质量,用双重PCR方法扩增PS1转基因片段,琼脂糖凝胶电泳观察结果;PCR产物测序证实其基因序列.结果 改良后的方法全程耗时不到8h,提取的基因组DNA在23 kb以上,完整性好,浓度为65～175 ng/μl.共繁殖子二代小鼠27窝计222只,存活206只,配伍组1子代存活率94.29％(99/105);配伍组2子代存活率91.67％(66/72);配伍组3子代存活率91.11％ (41/45),3组间存活率差异无统计学意义(P =0.423＞0.05).3种配伍产生的子代鼠转基因阳性率都基本符合孟德尔遗传规律,转基因阳性率差异有统计学意义(P=0.028 ＜0.05).配伍组1子代鼠雄鼠阳性率65.1％ (28/43),雌鼠阳性率35.7％ (20/56),差异有统计学意义(P=0.003 ＜0.05),性别与转基因阳性率相关(CO=0.280,P=0.004 ＜0.05);配伍组2子代鼠,雄鼠阳性率56.3％(18/32),雌鼠阳性率55.9％(19/34),差异无统计学意义(P =0.586 ＞0.05);配伍组3子代鼠,雄鼠阳性率81％(17/21),雌性阳性率65％(13/20),差异无统计学意义(P=0.212 ＞0.05).双重PCR产物经测序证实和预期完全一致.结论 Tg(APPswe,PSEN1dE9)85Dbo杂合子亲代配伍能产生存活至成年的纯合子子代鼠;改进后的基因分型可以作为小鼠基因分型的可靠方法,用于AD研究相关的胎鼠神经元培养实验,该动物模型杂合子雄鼠与野生型雌性鼠的配伍繁殖为最佳繁育筛选组合.
目的 探討老年性癡呆( Alzheimer disease,AD)轉基因模型鼠Tg(APPswe PSEN1 dE9)85Dbo的優化繁育和基因分型方法,篩選齣適閤AD研究的穩定轉基因動物.方法 3種不同的繁殖配伍分組(組1,+/+♂×-/-♀;組2,+/+♀×-/-♂;組3,+/+♀×+/+♂)研究子代鼠的存活率及PS1轉基因暘性率;提取子二代鼠尾基因組DNA併鑒定其質量,用雙重PCR方法擴增PS1轉基因片段,瓊脂糖凝膠電泳觀察結果;PCR產物測序證實其基因序列.結果 改良後的方法全程耗時不到8h,提取的基因組DNA在23 kb以上,完整性好,濃度為65～175 ng/μl.共繁殖子二代小鼠27窩計222隻,存活206隻,配伍組1子代存活率94.29％(99/105);配伍組2子代存活率91.67％(66/72);配伍組3子代存活率91.11％ (41/45),3組間存活率差異無統計學意義(P =0.423＞0.05).3種配伍產生的子代鼠轉基因暘性率都基本符閤孟德爾遺傳規律,轉基因暘性率差異有統計學意義(P=0.028 ＜0.05).配伍組1子代鼠雄鼠暘性率65.1％ (28/43),雌鼠暘性率35.7％ (20/56),差異有統計學意義(P=0.003 ＜0.05),性彆與轉基因暘性率相關(CO=0.280,P=0.004 ＜0.05);配伍組2子代鼠,雄鼠暘性率56.3％(18/32),雌鼠暘性率55.9％(19/34),差異無統計學意義(P =0.586 ＞0.05);配伍組3子代鼠,雄鼠暘性率81％(17/21),雌性暘性率65％(13/20),差異無統計學意義(P=0.212 ＞0.05).雙重PCR產物經測序證實和預期完全一緻.結論 Tg(APPswe,PSEN1dE9)85Dbo雜閤子親代配伍能產生存活至成年的純閤子子代鼠;改進後的基因分型可以作為小鼠基因分型的可靠方法,用于AD研究相關的胎鼠神經元培養實驗,該動物模型雜閤子雄鼠與野生型雌性鼠的配伍繁殖為最佳繁育篩選組閤.
목적 탐토노년성치태( Alzheimer disease,AD)전기인모형서Tg(APPswe PSEN1 dE9)85Dbo적우화번육화기인분형방법,사선출괄합AD연구적은정전기인동물.방법 3충불동적번식배오분조(조1,+/+♂×-/-♀;조2,+/+♀×-/-♂;조3,+/+♀×+/+♂)연구자대서적존활솔급PS1전기인양성솔;제취자이대서미기인조DNA병감정기질량,용쌍중PCR방법확증PS1전기인편단,경지당응효전영관찰결과;PCR산물측서증실기기인서렬.결과 개량후적방법전정모시불도8h,제취적기인조DNA재23 kb이상,완정성호,농도위65～175 ng/μl.공번식자이대소서27와계222지,존활206지,배오조1자대존활솔94.29％(99/105);배오조2자대존활솔91.67％(66/72);배오조3자대존활솔91.11％ (41/45),3조간존활솔차이무통계학의의(P =0.423＞0.05).3충배오산생적자대서전기인양성솔도기본부합맹덕이유전규률,전기인양성솔차이유통계학의의(P=0.028 ＜0.05).배오조1자대서웅서양성솔65.1％ (28/43),자서양성솔35.7％ (20/56),차이유통계학의의(P=0.003 ＜0.05),성별여전기인양성솔상관(CO=0.280,P=0.004 ＜0.05);배오조2자대서,웅서양성솔56.3％(18/32),자서양성솔55.9％(19/34),차이무통계학의의(P =0.586 ＞0.05);배오조3자대서,웅서양성솔81％(17/21),자성양성솔65％(13/20),차이무통계학의의(P=0.212 ＞0.05).쌍중PCR산물경측서증실화예기완전일치.결론 Tg(APPswe,PSEN1dE9)85Dbo잡합자친대배오능산생존활지성년적순합자자대서;개진후적기인분형가이작위소서기인분형적가고방법,용우AD연구상관적태서신경원배양실험,해동물모형잡합자웅서여야생형자성서적배오번식위최가번육사선조합.
