中西医结合学报
中西醫結閤學報
중서의결합학보
JOURNAL OF CHINESE INTEGRATIVE MDEICINE
2012年
11期
1272-1278
,共7页
淫羊藿苷%丝裂原激活蛋白激酶激酶%p38丝裂原活化蛋白激酶%细胞外信号调节MAP激酶%间质干细胞%骨质疏松
淫羊藿苷%絲裂原激活蛋白激酶激酶%p38絲裂原活化蛋白激酶%細胞外信號調節MAP激酶%間質榦細胞%骨質疏鬆
음양곽감%사렬원격활단백격매격매%p38사렬원활화단백격매%세포외신호조절MAP격매%간질간세포%골질소송
目的:探索补肾中药淫羊藿有效成分淫羊藿苷对间充质干细胞株C3H10T1/2的促成骨分化作用,及该作用与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的相关性.方法:体外培养间充质干细胞株C3H10T1/2,给予淫羊藿苷(0、10-7、10-6、10-5和10-4 mol/L)联合成骨诱导液干预26 d后,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色观察成骨分化情况.10-5 mol/L淫羊藿苷干预C3H10T1/2细胞2、8、24与48 h后,实时荧光定量聚合酶链式反应法(polymerase chain reaction,PCR)检测p38、细胞外调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,p42/44) mRNA的表达.10-5 mol/L淫羊藿苷干预C3H10T1/2细胞10、30、60和120 min后,蛋白质印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogenactivated protein kinase,p38)、p42和p44,以及翼式转录因子氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)及其磷酸化产物的蛋白表达情况.结果:10-5 mol/L淫羊藿苷联合成骨诱导液的促进C3H10T1/2细胞成骨分化能力最强.PCR结果显示,淫羊藿苷作用2h后p38基因表达显著下调(P＜0.01)；p42和p44 mRNA水平在淫羊藿苷干预2h后均显著下调(P＜0.01),而在淫羊藿苷干预48 h后表达均上调(P＜0.05,P＜0.01)；其他时间点各通路基因表达情况均无显著变化(P＞0.05).10-5 mol/L淫羊藿苷作用10 min后,磷酸化p42/44蛋白表达减弱,磷酸化p38蛋白表达增强,并持续到30 min,但对JNK蛋白的表达无明显影响.结论:淫羊藿苷促进间充质干细胞株C3H10T1/2向成骨细胞分化,其作用可能与激活p38和抑制ERK蛋白的表达有关.
目的:探索補腎中藥淫羊藿有效成分淫羊藿苷對間充質榦細胞株C3H10T1/2的促成骨分化作用,及該作用與絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信號通路的相關性.方法:體外培養間充質榦細胞株C3H10T1/2,給予淫羊藿苷(0、10-7、10-6、10-5和10-4 mol/L)聯閤成骨誘導液榦預26 d後,堿性燐痠酶(alkaline phosphatase,ALP)染色觀察成骨分化情況.10-5 mol/L淫羊藿苷榦預C3H10T1/2細胞2、8、24與48 h後,實時熒光定量聚閤酶鏈式反應法(polymerase chain reaction,PCR)檢測p38、細胞外調節蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,p42/44) mRNA的錶達.10-5 mol/L淫羊藿苷榦預C3H10T1/2細胞10、30、60和120 min後,蛋白質印跡法檢測p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogenactivated protein kinase,p38)、p42和p44,以及翼式轉錄因子氨基末耑激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)及其燐痠化產物的蛋白錶達情況.結果:10-5 mol/L淫羊藿苷聯閤成骨誘導液的促進C3H10T1/2細胞成骨分化能力最彊.PCR結果顯示,淫羊藿苷作用2h後p38基因錶達顯著下調(P＜0.01)；p42和p44 mRNA水平在淫羊藿苷榦預2h後均顯著下調(P＜0.01),而在淫羊藿苷榦預48 h後錶達均上調(P＜0.05,P＜0.01)；其他時間點各通路基因錶達情況均無顯著變化(P＞0.05).10-5 mol/L淫羊藿苷作用10 min後,燐痠化p42/44蛋白錶達減弱,燐痠化p38蛋白錶達增彊,併持續到30 min,但對JNK蛋白的錶達無明顯影響.結論:淫羊藿苷促進間充質榦細胞株C3H10T1/2嚮成骨細胞分化,其作用可能與激活p38和抑製ERK蛋白的錶達有關.
목적:탐색보신중약음양곽유효성분음양곽감대간충질간세포주C3H10T1/2적촉성골분화작용,급해작용여사렬원활화단백격매(mitogen-activated protein kinase,MAPK)신호통로적상관성.방법:체외배양간충질간세포주C3H10T1/2,급여음양곽감(0、10-7、10-6、10-5화10-4 mol/L)연합성골유도액간예26 d후,감성린산매(alkaline phosphatase,ALP)염색관찰성골분화정황.10-5 mol/L음양곽감간예C3H10T1/2세포2、8、24여48 h후,실시형광정량취합매련식반응법(polymerase chain reaction,PCR)검측p38、세포외조절단백격매(extracellular signal-regulated protein kinase,p42/44) mRNA적표체.10-5 mol/L음양곽감간예C3H10T1/2세포10、30、60화120 min후,단백질인적법검측p38사렬원활화단백격매(p38 mitogenactivated protein kinase,p38)、p42화p44,이급익식전록인자안기말단격매(c-Jun N-terminal kinase,JNK)급기린산화산물적단백표체정황.결과:10-5 mol/L음양곽감연합성골유도액적촉진C3H10T1/2세포성골분화능력최강.PCR결과현시,음양곽감작용2h후p38기인표체현저하조(P＜0.01)；p42화p44 mRNA수평재음양곽감간예2h후균현저하조(P＜0.01),이재음양곽감간예48 h후표체균상조(P＜0.05,P＜0.01)；기타시간점각통로기인표체정황균무현저변화(P＞0.05).10-5 mol/L음양곽감작용10 min후,린산화p42/44단백표체감약,린산화p38단백표체증강,병지속도30 min,단대JNK단백적표체무명현영향.결론:음양곽감촉진간충질간세포주C3H10T1/2향성골세포분화,기작용가능여격활p38화억제ERK단백적표체유관.
