山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2012年
42期
11-14
,共4页
李汇%毛用敏%赵莉莉%崔让庄%王佩显
李彙%毛用敏%趙莉莉%崔讓莊%王珮顯
리회%모용민%조리리%최양장%왕패현
腺病毒%金属蛋白酶组织抑制剂%基质金属蛋白酶%同型半胱氨酸%基因疗法
腺病毒%金屬蛋白酶組織抑製劑%基質金屬蛋白酶%同型半胱氨痠%基因療法
선병독%금속단백매조직억제제%기질금속단백매%동형반광안산%기인요법
目的 构建携带人金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)的重组腺病毒Ad-人TIMP1(hTIMP1),将其感染用同型半胱氨酸(Hcy)刺激的人脐静脉内皮细胞CRL-1730,观察该细胞基质金属蛋白酶(MMP)1、MMP9、TIMP1mRNA的表达变化.方法 在大肠杆菌BJ5183中通过同源重组构建重组腺病毒Ad-hTIMP1和对照重组腺病毒Ad-Track.将CRL-1730细胞分为空白对照组、Track对照组和基因治疗组,并根据加入Hcy浓度的不同各分为三个亚组,即空白对照组、生理浓度组和病理浓度组.病毒感染48 h后加入Hcy刺激,6h后收集各组CRL-1730细胞,RT-PCR法检测CRL-1730细胞中的MMP1、MMP9、TIMP1 mRNA.结果 Ad-hTIMP1和Ad-Track的滴度分别为1.9×1012 VP/mL和0.6×1012 VP/mL.基因治疗组Ad-hTIMP1感染CRL-1730细胞后,该细胞的TIMP1 mRNA表达明显高于空白对照组(P＜0.05),即使加入病理浓度的Hcy,CRL-1730细胞中TIMP1 mRNA的表达仍处于高水平,而MMP1、MMP9 mRNA的表达明显降低(P均＜0.05).结论 成功构建了Ad-hTIMP1和Ad-Track.重组腺病毒Ad-hTIMP1感染CRL-1730细胞后,该细胞中TIMP1 mRNA过表达,可抑制高浓度Hcy刺激造成的MMP1、MMP9 mRNA的表达升高,提示其可对抗Hcy对内皮细胞的损伤.
目的 構建攜帶人金屬蛋白酶組織抑製劑1(TIMP1)的重組腺病毒Ad-人TIMP1(hTIMP1),將其感染用同型半胱氨痠(Hcy)刺激的人臍靜脈內皮細胞CRL-1730,觀察該細胞基質金屬蛋白酶(MMP)1、MMP9、TIMP1mRNA的錶達變化.方法 在大腸桿菌BJ5183中通過同源重組構建重組腺病毒Ad-hTIMP1和對照重組腺病毒Ad-Track.將CRL-1730細胞分為空白對照組、Track對照組和基因治療組,併根據加入Hcy濃度的不同各分為三箇亞組,即空白對照組、生理濃度組和病理濃度組.病毒感染48 h後加入Hcy刺激,6h後收集各組CRL-1730細胞,RT-PCR法檢測CRL-1730細胞中的MMP1、MMP9、TIMP1 mRNA.結果 Ad-hTIMP1和Ad-Track的滴度分彆為1.9×1012 VP/mL和0.6×1012 VP/mL.基因治療組Ad-hTIMP1感染CRL-1730細胞後,該細胞的TIMP1 mRNA錶達明顯高于空白對照組(P＜0.05),即使加入病理濃度的Hcy,CRL-1730細胞中TIMP1 mRNA的錶達仍處于高水平,而MMP1、MMP9 mRNA的錶達明顯降低(P均＜0.05).結論 成功構建瞭Ad-hTIMP1和Ad-Track.重組腺病毒Ad-hTIMP1感染CRL-1730細胞後,該細胞中TIMP1 mRNA過錶達,可抑製高濃度Hcy刺激造成的MMP1、MMP9 mRNA的錶達升高,提示其可對抗Hcy對內皮細胞的損傷.
목적 구건휴대인금속단백매조직억제제1(TIMP1)적중조선병독Ad-인TIMP1(hTIMP1),장기감염용동형반광안산(Hcy)자격적인제정맥내피세포CRL-1730,관찰해세포기질금속단백매(MMP)1、MMP9、TIMP1mRNA적표체변화.방법 재대장간균BJ5183중통과동원중조구건중조선병독Ad-hTIMP1화대조중조선병독Ad-Track.장CRL-1730세포분위공백대조조、Track대조조화기인치료조,병근거가입Hcy농도적불동각분위삼개아조,즉공백대조조、생리농도조화병리농도조.병독감염48 h후가입Hcy자격,6h후수집각조CRL-1730세포,RT-PCR법검측CRL-1730세포중적MMP1、MMP9、TIMP1 mRNA.결과 Ad-hTIMP1화Ad-Track적적도분별위1.9×1012 VP/mL화0.6×1012 VP/mL.기인치료조Ad-hTIMP1감염CRL-1730세포후,해세포적TIMP1 mRNA표체명현고우공백대조조(P＜0.05),즉사가입병리농도적Hcy,CRL-1730세포중TIMP1 mRNA적표체잉처우고수평,이MMP1、MMP9 mRNA적표체명현강저(P균＜0.05).결론 성공구건료Ad-hTIMP1화Ad-Track.중조선병독Ad-hTIMP1감염CRL-1730세포후,해세포중TIMP1 mRNA과표체,가억제고농도Hcy자격조성적MMP1、MMP9 mRNA적표체승고,제시기가대항Hcy대내피세포적손상.
