CAJ | 학술논문

新生大鼠皮层神经元原代培养及糖-氧剥夺损伤模型的建立
신생대서피층신경원원대배양급당-양박탈손상모형적건립

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2014年 16期 54-54,55 ,共2页

杨传豪%赵冬%刘祺%姬云翔%李令建%许晖%戴晶%何学君%蔡云鹏%王业忠

양전호%조동%류기%희운상%리령건%허휘%대정%하학군%채운붕%왕업충

神经元%原代培养%neurobasal培养基%B27%糖-氧剥夺%细胞模型神經元%原代培養%neurobasal培養基%B27%糖-氧剝奪%細胞模型
신경원%원대배양%neurobasal배양기%B27%당-양박탈%세포모형

目的：建立较为简便的新生大鼠皮层神经元细胞原代培养方法并建立糖-氧剥夺细胞损伤模型。方法取新生的大鼠（24 h）大脑皮层组织，消化后种植在多聚-L-赖氨酸包被的六孔培养皿上，用含10%胎牛血清DEME-HG液种植，4~8 h后换再用含有B27的Neurobasal培养基维持饲养。于不同时间点在倒置相差显微镜下观察形态变化，用免疫组化方法对神经元特异性标记物NSE染色鉴定。选取培养第7 d的神经元随机分为不作处理的对照组和过糖-氧剥夺建立细胞损伤模型组，Western blotting检测NSE蛋白表达。结果2~8 h神经元细胞贴壁，随着时间的延长，形态呈多变，突起逐渐增多，神经元突起间相互接触形成网络，培养7~10 d时神经元胞体最为丰满，通过免疫组化验证证明所分离培养的是神经元细胞。糖-氧剥夺细胞损伤模型组NSE蛋白表达量较对照组 NSE蛋白表达量明显降低。结论该神经元方法简单易行，神经元纯度较高，并成功的建立糖-氧剥夺神经元损伤模型。
목적：건립교위간편적신생대서피층신경원세포원대배양방법병건립당-양박탈세포손상모형。방법취신생적대서（24 h）대뇌피층조직，소화후충식재다취-L-뢰안산포피적륙공배양명상，용함10%태우혈청DEME-HG액충식，4~8 h후환재용함유B27적Neurobasal배양기유지사양。우불동시간점재도치상차현미경하관찰형태변화，용면역조화방법대신경원특이성표기물NSE염색감정。선취배양제7 d적신경원수궤분위불작처리적대조조화과당-양박탈건립세포손상모형조，Western blotting검측NSE단백표체。결과2~8 h신경원세포첩벽，수착시간적연장，형태정다변，돌기축점증다，신경원돌기간상호접촉형성망락，배양7~10 d시신경원포체최위봉만，통과면역조화험증증명소분리배양적시신경원세포。당-양박탈세포손상모형조NSE단백표체량교대조조 NSE단백표체량명현강저。결론해신경원방법간단역행，신경원순도교고，병성공적건립당-양박탈신경원손상모형。