石河子大学学报（自然科学版）
石河子大學學報（自然科學版）
석하자대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SHIHEZI UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE)
2012年
5期
592-597
,共6页
姚楠%白杰%张雪梅%吴卫东%李文蓉
姚楠%白傑%張雪梅%吳衛東%李文蓉
요남%백걸%장설매%오위동%리문용
BPI%原核表达%真核表达
BPI%原覈錶達%真覈錶達
BPI%원핵표체%진핵표체
比较重组牛杀菌通透性增加蛋白(BPI)N端714bp编码序列的原核和真核表达载体在大肠杆菌和HEK293细胞中的表达,为进一步研究BPI蛋白N端的功能奠定基础.采用RT-PCR方法从牛的外周血中扩增出BPI蛋白N端的714bp基因片段,分别克隆至原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pLEX-MCS后,再分别转化大肠杆菌BL21菌株、感染HEK293细胞进行重组蛋白的表达.Western blotting检测重组BPI蛋白N端在原核和真核细胞中的表达.结果显示:BPI蛋白N端的原核表达载体pGEX-BPI714和真核表达载体pLEX-BPI714导入原核和真核细胞中均得到表达.Western blotting检测显示,重组GST-BPI714融合蛋白在大肠杆菌中仅能低水平表达,且大都以包涵体形式存在;相反,构建的真核表达载体pLEX-BPI714转染到HEK293细胞后,特异的目的蛋白能高效表达.本研究成功构建了牛源BPI714原核表达载体和真核表达载体,重组BPI714在大肠杆菌中表达不稳定,在HEK293细胞中能够稳定表达.
比較重組牛殺菌通透性增加蛋白(BPI)N耑714bp編碼序列的原覈和真覈錶達載體在大腸桿菌和HEK293細胞中的錶達,為進一步研究BPI蛋白N耑的功能奠定基礎.採用RT-PCR方法從牛的外週血中擴增齣BPI蛋白N耑的714bp基因片段,分彆剋隆至原覈錶達載體pGEX-4T-1和真覈錶達載體pLEX-MCS後,再分彆轉化大腸桿菌BL21菌株、感染HEK293細胞進行重組蛋白的錶達.Western blotting檢測重組BPI蛋白N耑在原覈和真覈細胞中的錶達.結果顯示:BPI蛋白N耑的原覈錶達載體pGEX-BPI714和真覈錶達載體pLEX-BPI714導入原覈和真覈細胞中均得到錶達.Western blotting檢測顯示,重組GST-BPI714融閤蛋白在大腸桿菌中僅能低水平錶達,且大都以包涵體形式存在;相反,構建的真覈錶達載體pLEX-BPI714轉染到HEK293細胞後,特異的目的蛋白能高效錶達.本研究成功構建瞭牛源BPI714原覈錶達載體和真覈錶達載體,重組BPI714在大腸桿菌中錶達不穩定,在HEK293細胞中能夠穩定錶達.
비교중조우살균통투성증가단백(BPI)N단714bp편마서렬적원핵화진핵표체재체재대장간균화HEK293세포중적표체,위진일보연구BPI단백N단적공능전정기출.채용RT-PCR방법종우적외주혈중확증출BPI단백N단적714bp기인편단,분별극륭지원핵표체재체pGEX-4T-1화진핵표체재체pLEX-MCS후,재분별전화대장간균BL21균주、감염HEK293세포진행중조단백적표체.Western blotting검측중조BPI단백N단재원핵화진핵세포중적표체.결과현시:BPI단백N단적원핵표체재체pGEX-BPI714화진핵표체재체pLEX-BPI714도입원핵화진핵세포중균득도표체.Western blotting검측현시,중조GST-BPI714융합단백재대장간균중부능저수평표체,차대도이포함체형식존재;상반,구건적진핵표체재체pLEX-BPI714전염도HEK293세포후,특이적목적단백능고효표체.본연구성공구건료우원BPI714원핵표체재체화진핵표체재체,중조BPI714재대장간균중표체불은정,재HEK293세포중능구은정표체.
