解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2012年
5期
624-628
,共5页
朱甫祥%刘泽隆%缪静%屈慧鸽%迟晓艳
硃甫祥%劉澤隆%繆靜%屈慧鴿%遲曉豔
주보상%류택륭%무정%굴혜합%지효염
凝血因子Ⅷ%免疫球蛋白重链结合蛋白%蛋白质剪接%双链转基因%免疫印迹法%酶联免疫吸附测定%发色分析法
凝血因子Ⅷ%免疫毬蛋白重鏈結閤蛋白%蛋白質剪接%雙鏈轉基因%免疫印跡法%酶聯免疫吸附測定%髮色分析法
응혈인자Ⅷ%면역구단백중련결합단백%단백질전접%쌍련전기인%면역인적법%매련면역흡부측정%발색분석법
目的 探讨用RNA干扰技术下调内质网蛋白伴侣免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)的表达,对基于蛋白质剪接的双链共转凝血因子VIII (FⅧ)基因HEK293细胞分泌剪接FⅧ蛋白的量和活性的影响.方法 以培养的HEK293细胞,用含蛋白内含子的B区缺失型FⅧ( BDD-FⅧ)的重链和轻链基因表达载体共转染经Bip-siRNA处理的细胞,免疫印迹法检测Bip的表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生长,用酶联免疫吸附( ELISA)和发色分析法分析转基因细胞分泌的剪接BDD-FⅧ蛋白量和活性.结果 RNA干扰下调Bip表达作用明显,细胞生长不受影响；Bip下调的共转基因细胞分泌的剪接BDD-FⅧ和重链量分别为(142±33) μg/L和(197±43) μg/L,明显高于对照细胞[分别为(89±23)μg/L和(120±27) μg/L]；Bip下调的共转基因细胞分泌的FⅧ凝血活性为(1 050±160)IU/L,明显高于对照细胞[640±170(IU/L)].结论 Bip表达下调通过促进剪接BDD-FⅧ的分泌可有效提高基于蛋白质剪接的双载体转BDD-FⅧ基因功效,为进一步动物体内实验提供了依据.
目的 探討用RNA榦擾技術下調內質網蛋白伴侶免疫毬蛋白重鏈結閤蛋白(Bip)的錶達,對基于蛋白質剪接的雙鏈共轉凝血因子VIII (FⅧ)基因HEK293細胞分泌剪接FⅧ蛋白的量和活性的影響.方法 以培養的HEK293細胞,用含蛋白內含子的B區缺失型FⅧ( BDD-FⅧ)的重鏈和輕鏈基因錶達載體共轉染經Bip-siRNA處理的細胞,免疫印跡法檢測Bip的錶達,四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測細胞生長,用酶聯免疫吸附( ELISA)和髮色分析法分析轉基因細胞分泌的剪接BDD-FⅧ蛋白量和活性.結果 RNA榦擾下調Bip錶達作用明顯,細胞生長不受影響；Bip下調的共轉基因細胞分泌的剪接BDD-FⅧ和重鏈量分彆為(142±33) μg/L和(197±43) μg/L,明顯高于對照細胞[分彆為(89±23)μg/L和(120±27) μg/L]；Bip下調的共轉基因細胞分泌的FⅧ凝血活性為(1 050±160)IU/L,明顯高于對照細胞[640±170(IU/L)].結論 Bip錶達下調通過促進剪接BDD-FⅧ的分泌可有效提高基于蛋白質剪接的雙載體轉BDD-FⅧ基因功效,為進一步動物體內實驗提供瞭依據.
목적 탐토용RNA간우기술하조내질망단백반려면역구단백중련결합단백(Bip)적표체,대기우단백질전접적쌍련공전응혈인자VIII (FⅧ)기인HEK293세포분비전접FⅧ단백적량화활성적영향.방법 이배양적HEK293세포,용함단백내함자적B구결실형FⅧ( BDD-FⅧ)적중련화경련기인표체재체공전염경Bip-siRNA처리적세포,면역인적법검측Bip적표체,사갑기우담서염(MTT)법검측세포생장,용매련면역흡부( ELISA)화발색분석법분석전기인세포분비적전접BDD-FⅧ단백량화활성.결과 RNA간우하조Bip표체작용명현,세포생장불수영향；Bip하조적공전기인세포분비적전접BDD-FⅧ화중련량분별위(142±33) μg/L화(197±43) μg/L,명현고우대조세포[분별위(89±23)μg/L화(120±27) μg/L]；Bip하조적공전기인세포분비적FⅧ응혈활성위(1 050±160)IU/L,명현고우대조세포[640±170(IU/L)].결론 Bip표체하조통과촉진전접BDD-FⅧ적분비가유효제고기우단백질전접적쌍재체전BDD-FⅧ기인공효,위진일보동물체내실험제공료의거.
