解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2012年
5期
608-613
,共6页
魏建宏%张红梅%牛侨%聂继盛
魏建宏%張紅梅%牛僑%聶繼盛
위건굉%장홍매%우교%섭계성
苯并(a)芘%细胞毒性%CYP1A1%Annexin V和PI双染法%反转录-聚合酶链反应%免疫组织化学%大鼠
苯併(a)芘%細胞毒性%CYP1A1%Annexin V和PI雙染法%反轉錄-聚閤酶鏈反應%免疫組織化學%大鼠
분병(a)비%세포독성%CYP1A1%Annexin V화PI쌍염법%반전록-취합매련반응%면역조직화학%대서
目的 探讨苯并(a)芘[B(a)P]对神经细胞毒性、细胞凋亡与细胞色素P4501Al( CYP1A1)诱导表达的关系.方法 选用新生1 ~3d的SD大鼠,分离大脑皮质,进行神经元培养,在细胞培养第5天左右,选取生长良好的同批次神经细胞,以苯并(a)芘分别对神经细胞染毒,使苯并(a)芘终浓度分别为0μmoL/L、10μmol/L、20μmol/L、40μ.mol/L.继续培养40h,应用cck8试剂盒检测神经细胞活力、Annexin V和PI双染法进行细胞凋亡的检测,应用RT-PCR法检测神经细胞CYP1A1mRNA的表达,免疫组织化学SABC法检测神经元CYP1A1蛋白的表达.结果 随着苯并[a]芘浓度的增加,神经细胞活力降低,早期凋亡率逐渐增高,细胞活力中高剂量组与对照组比较差异均有统计学意义,早期凋亡率仅高剂量组与对照组比较差异有统计学意义,趋势检验表明,细胞活力降低、凋亡率增高具有剂量依赖性.而且随B(a)P剂量的增高,CYP1A1mRNA及蛋白表达增多,有剂量-反应关系,CYP1A1基因和蛋白表达与神经细胞凋亡率的相关分析表明,神经细胞凋亡率与CYP1A1 mRNA表达呈正相关(r=0.831,P<0.01);与CYP1A1蛋白表达呈正相关(r=0.780,P<0.01).结论 苯并[a]芘可致神经细胞凋亡,神经细胞CYP1A1诱导表达是神经细胞损伤的关键因素.
目的 探討苯併(a)芘[B(a)P]對神經細胞毒性、細胞凋亡與細胞色素P4501Al( CYP1A1)誘導錶達的關繫.方法 選用新生1 ~3d的SD大鼠,分離大腦皮質,進行神經元培養,在細胞培養第5天左右,選取生長良好的同批次神經細胞,以苯併(a)芘分彆對神經細胞染毒,使苯併(a)芘終濃度分彆為0μmoL/L、10μmol/L、20μmol/L、40μ.mol/L.繼續培養40h,應用cck8試劑盒檢測神經細胞活力、Annexin V和PI雙染法進行細胞凋亡的檢測,應用RT-PCR法檢測神經細胞CYP1A1mRNA的錶達,免疫組織化學SABC法檢測神經元CYP1A1蛋白的錶達.結果 隨著苯併[a]芘濃度的增加,神經細胞活力降低,早期凋亡率逐漸增高,細胞活力中高劑量組與對照組比較差異均有統計學意義,早期凋亡率僅高劑量組與對照組比較差異有統計學意義,趨勢檢驗錶明,細胞活力降低、凋亡率增高具有劑量依賴性.而且隨B(a)P劑量的增高,CYP1A1mRNA及蛋白錶達增多,有劑量-反應關繫,CYP1A1基因和蛋白錶達與神經細胞凋亡率的相關分析錶明,神經細胞凋亡率與CYP1A1 mRNA錶達呈正相關(r=0.831,P<0.01);與CYP1A1蛋白錶達呈正相關(r=0.780,P<0.01).結論 苯併[a]芘可緻神經細胞凋亡,神經細胞CYP1A1誘導錶達是神經細胞損傷的關鍵因素.
목적 탐토분병(a)비[B(a)P]대신경세포독성、세포조망여세포색소P4501Al( CYP1A1)유도표체적관계.방법 선용신생1 ~3d적SD대서,분리대뇌피질,진행신경원배양,재세포배양제5천좌우,선취생장량호적동비차신경세포,이분병(a)비분별대신경세포염독,사분병(a)비종농도분별위0μmoL/L、10μmol/L、20μmol/L、40μ.mol/L.계속배양40h,응용cck8시제합검측신경세포활력、Annexin V화PI쌍염법진행세포조망적검측,응용RT-PCR법검측신경세포CYP1A1mRNA적표체,면역조직화학SABC법검측신경원CYP1A1단백적표체.결과 수착분병[a]비농도적증가,신경세포활력강저,조기조망솔축점증고,세포활력중고제량조여대조조비교차이균유통계학의의,조기조망솔부고제량조여대조조비교차이유통계학의의,추세검험표명,세포활력강저、조망솔증고구유제량의뢰성.이차수B(a)P제량적증고,CYP1A1mRNA급단백표체증다,유제량-반응관계,CYP1A1기인화단백표체여신경세포조망솔적상관분석표명,신경세포조망솔여CYP1A1 mRNA표체정정상관(r=0.831,P<0.01);여CYP1A1단백표체정정상관(r=0.780,P<0.01).결론 분병[a]비가치신경세포조망,신경세포CYP1A1유도표체시신경세포손상적관건인소.