工业微生物
工業微生物
공업미생물
INDUSTRIAL MICROBIOLOGY
2012年
5期
29-34
,共6页
程晨%辛瑜%张玲%王武%杨海麟
程晨%辛瑜%張玲%王武%楊海麟
정신%신유%장령%왕무%양해린
组氨酸标签%胆固醇氧化酶%大肠杆菌
組氨痠標籤%膽固醇氧化酶%大腸桿菌
조안산표첨%담고순양화매%대장간균
为考察组氨酸标签(His-tag)对Brevibacterium sp.DGCDC-82中胆固醇氧化酶基因(ChoAb)在大肠杆菌中表达的影响,将PCR扩增后得到的结构基因与pET28a(+)连接,构建重组质粒pETChoAb(不带His-tag),pETChoAbn(His-tag位于N端)和pETChoAbc(His-tag位于C端)并在大肠杆菌中进行表达.对重组酶进行酶活检测,结果表明His-tag位于ChoAb的C端和N端,COD单位体积酶活由未带标签时的1.72 U/mL分别提高到4.03 U/mL和11.36 U/mL.利用软件Quantity One对SDS-PAGE电泳条带进行灰度分析,结果显示与不带His-tag的COD相比,His-tag位于ChoAb的C端和N端,COD表达量由8.8％增加到16.4％与72.3％.同时菌体浓度分别提高了1.2倍和3.2倍.作为纯化标签,该研究结果对His-tag用于诊断用酶COD的分离纯化可以提供一定的理论指导.
為攷察組氨痠標籤(His-tag)對Brevibacterium sp.DGCDC-82中膽固醇氧化酶基因(ChoAb)在大腸桿菌中錶達的影響,將PCR擴增後得到的結構基因與pET28a(+)連接,構建重組質粒pETChoAb(不帶His-tag),pETChoAbn(His-tag位于N耑)和pETChoAbc(His-tag位于C耑)併在大腸桿菌中進行錶達.對重組酶進行酶活檢測,結果錶明His-tag位于ChoAb的C耑和N耑,COD單位體積酶活由未帶標籤時的1.72 U/mL分彆提高到4.03 U/mL和11.36 U/mL.利用軟件Quantity One對SDS-PAGE電泳條帶進行灰度分析,結果顯示與不帶His-tag的COD相比,His-tag位于ChoAb的C耑和N耑,COD錶達量由8.8％增加到16.4％與72.3％.同時菌體濃度分彆提高瞭1.2倍和3.2倍.作為純化標籤,該研究結果對His-tag用于診斷用酶COD的分離純化可以提供一定的理論指導.
위고찰조안산표첨(His-tag)대Brevibacterium sp.DGCDC-82중담고순양화매기인(ChoAb)재대장간균중표체적영향,장PCR확증후득도적결구기인여pET28a(+)련접,구건중조질립pETChoAb(불대His-tag),pETChoAbn(His-tag위우N단)화pETChoAbc(His-tag위우C단)병재대장간균중진행표체.대중조매진행매활검측,결과표명His-tag위우ChoAb적C단화N단,COD단위체적매활유미대표첨시적1.72 U/mL분별제고도4.03 U/mL화11.36 U/mL.이용연건Quantity One대SDS-PAGE전영조대진행회도분석,결과현시여불대His-tag적COD상비,His-tag위우ChoAb적C단화N단,COD표체량유8.8％증가도16.4％여72.3％.동시균체농도분별제고료1.2배화3.2배.작위순화표첨,해연구결과대His-tag용우진단용매COD적분리순화가이제공일정적이론지도.
