东北农业大学学报
東北農業大學學報
동북농업대학학보
JOURNAL OF NORTHEAST AGRICULTURAL UNIVERSITY
2014年
6期
57-60,90
,共5页
郑世民%周首龙%赵良友%刘超男%高雪丽%吕晓萍
鄭世民%週首龍%趙良友%劉超男%高雪麗%呂曉萍
정세민%주수룡%조량우%류초남%고설려%려효평
猪传染性胃肠炎病毒%猪流行性腹泻病毒%反转录聚合酶链式反应%反应条件
豬傳染性胃腸炎病毒%豬流行性腹瀉病毒%反轉錄聚閤酶鏈式反應%反應條件
저전염성위장염병독%저류행성복사병독%반전록취합매련식반응%반응조건
transmissible gastroenteritis virus%porcine epidemic diarrhea virus%duplex RT-PCR%reaction condition
为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的快速检测方法,参照GenBank已发表序列,根据TGEV和PEDV的S蛋白基因结构各设计1套特异性通用引物,扩增目的带分别为426和583 bp。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,紫外光下于500 bp上、下各有一条电泳带,达到区分和鉴别目的。经优化确立最佳反应体系:引物、MgCl2和dNTP浓度分别为8、9和14μmol·L-1,退火温度54℃。该方法在捕获信息和复杂基因分析方面具有快速、敏感、特异、低成本等优点,可为TGEV和PEDV检测及TGE和PED流行病学调查等提供技术支持。
為建立豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)和豬流行性腹瀉病毒(PEDV)的快速檢測方法,參照GenBank已髮錶序列,根據TGEV和PEDV的S蛋白基因結構各設計1套特異性通用引物,擴增目的帶分彆為426和583 bp。擴增產物經瓊脂糖凝膠電泳,紫外光下于500 bp上、下各有一條電泳帶,達到區分和鑒彆目的。經優化確立最佳反應體繫:引物、MgCl2和dNTP濃度分彆為8、9和14μmol·L-1,退火溫度54℃。該方法在捕穫信息和複雜基因分析方麵具有快速、敏感、特異、低成本等優點,可為TGEV和PEDV檢測及TGE和PED流行病學調查等提供技術支持。
위건립저전염성위장염병독(TGEV)화저류행성복사병독(PEDV)적쾌속검측방법,삼조GenBank이발표서렬,근거TGEV화PEDV적S단백기인결구각설계1투특이성통용인물,확증목적대분별위426화583 bp。확증산물경경지당응효전영,자외광하우500 bp상、하각유일조전영대,체도구분화감별목적。경우화학립최가반응체계:인물、MgCl2화dNTP농도분별위8、9화14μmol·L-1,퇴화온도54℃。해방법재포획신식화복잡기인분석방면구유쾌속、민감、특이、저성본등우점,가위TGEV화PEDV검측급TGE화PED류행병학조사등제공기술지지。
Arapidduplex RT-PCR assay was developed for simultaneous detection and discrimination of transmissible gastroenteritis virus (TGEV) and porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) using the primers designed basing on their S protein gene reported in GenBank. The producedemonstrated after agarose gels electrophoresis stained with ethidium bromide that one specific cDNA band of 426 bp for TGEV and another specific cDNA band of 583 bp for PEDV up and down the 500bp indicating band. Optimization reaction system:concentration of primers, MgCl2 and dNTP were 8, 9 and 14μmol·L-1, respectively, and renaturation temperature was 54 ℃. This method took the advantages of rapid, sensitive, specific, andlow cost, in capturing information, analyzing the complexity of gene, which could provide technical support for detection of TGEV and PEDV, and epidemiological investigation of TGE and PED, etc.