军事医学
軍事醫學
군사의학
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2013年
8期
578-581
,共4页
代东发%袁方%于坤%梁飞%刘楠%龙娟%赵晓%奚永志%孙玉英
代東髮%袁方%于坤%樑飛%劉楠%龍娟%趙曉%奚永誌%孫玉英
대동발%원방%우곤%량비%류남%룡연%조효%해영지%손옥영
HLA-B* 2705%分子结构%可溶性表达%包涵体
HLA-B* 2705%分子結構%可溶性錶達%包涵體
HLA-B* 2705%분자결구%가용성표체%포함체
HLA-B * 2705%molecular structure%soluble expression%inclusion bodies
目的 研究人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-B*2705分子结构对其在原核细胞可溶性表达的影响.方法 采用RT-PCR法将HLA-B * 2705基因的全长、胞外区和α1、α2功能区分别进行克隆并连接到pET-32a(+)表达载体.经IPTG诱导表达,并经超声破碎、层析和透析纯化蛋白,再经体外微量细胞淋巴毒反应检测蛋白质活性.结果 成功构建3种pET-32a(+)表达载体,经IPTG诱导后,HLA-B* 2705基因全长和胞外区主要以包涵体的形式表达,可溶性蛋白的量较低；而α1和α2功能区则以高效可溶性形式表达,通过体外微量细胞淋巴毒实验证实,HLA-B* 2705的α1和α2功能区可溶性蛋白可与HLA-B27抗体特异性结合,并成功阻断补体介导的细胞毒作用.结论 α1和α2功能区能够在原核细胞中高效表达可溶性蛋白,并具有蛋白功能,而HLA-B* 2705基因全长和胞外区主要以包涵体的形式表达,表明蛋白质的大小和空间结构对于其可溶性表达具有重要影响.
目的 研究人類白細胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-B*2705分子結構對其在原覈細胞可溶性錶達的影響.方法 採用RT-PCR法將HLA-B * 2705基因的全長、胞外區和α1、α2功能區分彆進行剋隆併連接到pET-32a(+)錶達載體.經IPTG誘導錶達,併經超聲破碎、層析和透析純化蛋白,再經體外微量細胞淋巴毒反應檢測蛋白質活性.結果 成功構建3種pET-32a(+)錶達載體,經IPTG誘導後,HLA-B* 2705基因全長和胞外區主要以包涵體的形式錶達,可溶性蛋白的量較低；而α1和α2功能區則以高效可溶性形式錶達,通過體外微量細胞淋巴毒實驗證實,HLA-B* 2705的α1和α2功能區可溶性蛋白可與HLA-B27抗體特異性結閤,併成功阻斷補體介導的細胞毒作用.結論 α1和α2功能區能夠在原覈細胞中高效錶達可溶性蛋白,併具有蛋白功能,而HLA-B* 2705基因全長和胞外區主要以包涵體的形式錶達,錶明蛋白質的大小和空間結構對于其可溶性錶達具有重要影響.
목적 연구인류백세포항원(human leukocyte antigen,HLA)-B*2705분자결구대기재원핵세포가용성표체적영향.방법 채용RT-PCR법장HLA-B * 2705기인적전장、포외구화α1、α2공능구분별진행극륭병련접도pET-32a(+)표체재체.경IPTG유도표체,병경초성파쇄、층석화투석순화단백,재경체외미량세포림파독반응검측단백질활성.결과 성공구건3충pET-32a(+)표체재체,경IPTG유도후,HLA-B* 2705기인전장화포외구주요이포함체적형식표체,가용성단백적량교저；이α1화α2공능구칙이고효가용성형식표체,통과체외미량세포림파독실험증실,HLA-B* 2705적α1화α2공능구가용성단백가여HLA-B27항체특이성결합,병성공조단보체개도적세포독작용.결론 α1화α2공능구능구재원핵세포중고효표체가용성단백,병구유단백공능,이HLA-B* 2705기인전장화포외구주요이포함체적형식표체,표명단백질적대소화공간결구대우기가용성표체구유중요영향.
