中国药理学通报
中國藥理學通報
중국약이학통보
CHINESE PHARMACOLOGICAL BULLETIN
2012年
12期
1671-1674
,共4页
丁道芳%王瑧%李晓锋%徐乐勤%梁倩倩%王拥军
丁道芳%王瑧%李曉鋒%徐樂勤%樑倩倩%王擁軍
정도방%왕진%리효봉%서악근%량천천%왕옹군
穿透性%9R-Sox2%细胞免疫荧光%Western blot%增殖细胞核抗原%小鼠胚胎成纤维细胞
穿透性%9R-Sox2%細胞免疫熒光%Western blot%增殖細胞覈抗原%小鼠胚胎成纖維細胞
천투성%9R-Sox2%세포면역형광%Western blot%증식세포핵항원%소서배태성섬유세포
目的 构建具有细胞性穿透性的9R-Sox2蛋白的重组质粒,使其在293T细胞中表达,并对所表达的9R-Sox2蛋白的功能进行鉴定.方法 从小鼠胚胎干细胞中扩增Sox2基因,并且在其N端加上9个精氨酸短肽,此融合基因连接到pPYCAG载体上,pPYCAG-9R-Sox2和pPYCAG分别转染到293T细胞中.3 d后,对转染细胞用嘌呤霉素筛选,1周后筛选得到阳性克隆细胞株,对其进行细胞免疫荧光鉴定.表达9R-Sox2蛋白的细胞株进行裂解,取细胞裂解液加入至小鼠胚胎成纤维细胞的培养基中进行通透.48 h后,小鼠胚胎成纤维细胞进行细胞免疫荧光检测,并提取蛋白Western blot检测PCNA表达.结果 用Sox2抗体进行细胞免疫荧光鉴定,结果均显示所有细胞表达9R-Sox2.在细胞裂解液处理的成纤维细胞,细胞免疫荧光结果显示9R-Sox2蛋白定位在细胞核,表明9R-Sox2构建和翻译正确.同时经含9R-Sox2的细胞裂解液处理的成纤维细胞,PCNA表达明显上调.结论 成功构建表达9R-Sox2融合蛋白的pPYCAG-9R-Sox2重组质粒,并证明具有细胞通透及促细胞增殖功能.
目的 構建具有細胞性穿透性的9R-Sox2蛋白的重組質粒,使其在293T細胞中錶達,併對所錶達的9R-Sox2蛋白的功能進行鑒定.方法 從小鼠胚胎榦細胞中擴增Sox2基因,併且在其N耑加上9箇精氨痠短肽,此融閤基因連接到pPYCAG載體上,pPYCAG-9R-Sox2和pPYCAG分彆轉染到293T細胞中.3 d後,對轉染細胞用嘌呤黴素篩選,1週後篩選得到暘性剋隆細胞株,對其進行細胞免疫熒光鑒定.錶達9R-Sox2蛋白的細胞株進行裂解,取細胞裂解液加入至小鼠胚胎成纖維細胞的培養基中進行通透.48 h後,小鼠胚胎成纖維細胞進行細胞免疫熒光檢測,併提取蛋白Western blot檢測PCNA錶達.結果 用Sox2抗體進行細胞免疫熒光鑒定,結果均顯示所有細胞錶達9R-Sox2.在細胞裂解液處理的成纖維細胞,細胞免疫熒光結果顯示9R-Sox2蛋白定位在細胞覈,錶明9R-Sox2構建和翻譯正確.同時經含9R-Sox2的細胞裂解液處理的成纖維細胞,PCNA錶達明顯上調.結論 成功構建錶達9R-Sox2融閤蛋白的pPYCAG-9R-Sox2重組質粒,併證明具有細胞通透及促細胞增殖功能.
목적 구건구유세포성천투성적9R-Sox2단백적중조질립,사기재293T세포중표체,병대소표체적9R-Sox2단백적공능진행감정.방법 종소서배태간세포중확증Sox2기인,병차재기N단가상9개정안산단태,차융합기인련접도pPYCAG재체상,pPYCAG-9R-Sox2화pPYCAG분별전염도293T세포중.3 d후,대전염세포용표령매소사선,1주후사선득도양성극륭세포주,대기진행세포면역형광감정.표체9R-Sox2단백적세포주진행렬해,취세포렬해액가입지소서배태성섬유세포적배양기중진행통투.48 h후,소서배태성섬유세포진행세포면역형광검측,병제취단백Western blot검측PCNA표체.결과 용Sox2항체진행세포면역형광감정,결과균현시소유세포표체9R-Sox2.재세포렬해액처리적성섬유세포,세포면역형광결과현시9R-Sox2단백정위재세포핵,표명9R-Sox2구건화번역정학.동시경함9R-Sox2적세포렬해액처리적성섬유세포,PCNA표체명현상조.결론 성공구건표체9R-Sox2융합단백적pPYCAG-9R-Sox2중조질립,병증명구유세포통투급촉세포증식공능.
